ICS 65.020.20 B 05 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 2828—2018 马铃薯抗旱性鉴定技术规程 2018 - 09 - 21 发布 河北省质量技术监督局 2018 - 10 - 21 实施 发 布 DB13/T 2828—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北北方学院提出。 本标准由河北北方学院起草。 本标准主要起草人员：王燕、王宽、罗亚婷、郭三妮、王磊、冯琰、吴桂丽、祁利潘、刘畅、孙 明磊、李梦、苏云、柴莹、尹江、龚学臣。 I DB13/T 2828—2018 马铃薯抗旱性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯抗旱性鉴定方法及使用规则。 本标准适用于马铃薯品种、种质资源的抗旱性鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 18133 马铃薯种薯 DB13/T 865-2007 马铃薯有机栽培技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗旱系数 drought resistance coefficient（DRC） 抗旱系数是同一材料的同一指标干旱处理组测定值与对照组测定值的比值。 3.2 抗旱指数 drought resistance index （DRI） 抗旱指数是指抗旱系数与某材料旱地产量之积，再除以所有材料的平均旱地产量。 3.3 抗旱性级别 grade of drought resistance 抗旱性分五级，从强到弱依次为：1级，极强（HR，highly resistant）；2级，强（R，resistant ）； 3级，中等（MR，middle resistant）；4级，弱（S，susceptible ）；5级，极弱（HS，highly susceptible）。 4 鉴定方法 马铃薯抗旱性鉴定时期分为苗期和全生育期两个时期，可根据工作目的，选用不同时期的鉴定结 果判定待测材料的抗旱性。 4.1 苗期抗旱性鉴定 苗期抗旱性鉴定在温室或旱棚内进行。 4.1.1 种薯准备 1 DB13/T 2828—2018 种薯质量应符合GB 18133的要求。为减少种薯差异，先将块茎放于18 ℃条件下催芽，待芽长1 cm 左右，按单芽切块，每个切块重相等（7 g±0.5 g），备用。 4.1.2 播种 将准备好的芽块播种于口直径15 cm的塑料盆中，盆中用透水性好的沙壤土（也可以用水洗沙）， 播后统一灌溉，出苗后，每盆只留1个茎，每个材料种植20株，3次重复。 4.1.3 干旱胁迫处理 干旱处理材料在出苗后40 d停止灌水7～8片叶，使土壤水分保持在田间最大持水量的30 %±3 %， 处理72 h后采集样品。 4.1.4 非干旱胁迫处理 正常供水材料按植株正常生长需要，给以充足水分，使土壤水分保持在田间最大持水量55 %±5 %。 4.1.5 样品采集 干旱胁迫处理组胁迫72h后取处理组和对照组主茎中上部功能叶片1～2片置于冷藏箱内带回实验 室备用。 4.1.6 测定指标和方法 马铃薯生理生化指标的测定按照常规植物生理生化指标的测定方法。 叶绿素含量测定（SPAD502叶绿素仪测定）； 过氧化物酶（POD）活性测定（愈创木酚法），见附表A； 过氧化氢酶（CAT）活性（紫外吸收法），见附表B； 丙二醛（MDA）含量（硫代巴比妥酸），见附表C 4.1.7 隶属函数值 数据分析采用隶属函数法。 首先用（1）式求每材料各指标的抗旱系数，用（2）式或（3）式求每个材料各指标的具体隶属函 数值，用（4）式求每材料的平均隶属函数值: 抗旱系数 DRC=干旱处理测定值/对照测定值………………………………………………（1） Uij=(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin)……………………………………………（2） 或 Uij=1-(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin)……………………………………………（3） 1 n Ui= n  Uij j 1 ……………………………………………（4） 式中: Uij——i材料j指标的隶属函数值； Xij——为i材料j指标的抗旱系数； Xmax——为所有材料中此指标的最大值； Xmin——为所有材料中此指标的最小值； Ui——为i材料各性状的平均抗旱隶属函数值。 注：叶绿素、过氧化氢和过氧化物等指标的隶属函数值计算用(2)式，丙二醛指标的隶属函数值计算用(3)式。 2 DB13/T 2828—2018 4.1.8 苗期抗旱性评价标准 马铃薯苗期抗旱性评价标准应符合表1。 表 1 马铃薯苗期抗旱性评价标准 级别 平均抗旱隶属函数值(Ui) 抗旱性 1 Ui≥0.63 极强（HR） 2 0.53≤Ui<0.63 强（R） 3 0.37≤Ui<0.53 中等（MR） 4 0.28≤Ui<0.37 弱（S） 5 Ui<0.28 极弱（HS） 4.2 全生育期抗旱性鉴定 马铃薯全生育期抗旱性鉴定在旱棚内进行。 4.2.1 种薯要求 同4.1.1。 4.2.2 试验设计 旱棚内用塑料布深埋1米，把旱棚面积分成相等的两区域，一区域用于正常浇水材料种植，一区域 用于干旱胁迫处理材料种植。每区域内部材料随机排列，三次重复。 4.2.3 干旱胁迫处理 干旱处理区播种后少量灌水，确保苗全苗齐。出苗后至收获不供水。 4.2.4 非干旱胁迫处理 对照试验的土壤状况与胁迫处理的基本一致，保证马铃薯全生育期处于水分适宜状态。其它管理 与胁迫处理一致。 4.2.5 栽培管理 参考引用标准 整地、播种、田间管理等栽培技术应符合DB13/T 865-2007。 4.2.6 收获记产 每个材料取10个单株的薯块计产。 4.2.7 抗旱指数 抗旱指数按式（5）计算。 DRI= YD YD  n ………………………………………………（5） Yw 1  YDj n j 1 3 DB13/T 2828—2018 式中： DRI——抗旱指数； YD——干旱胁迫处理产量（kg）； YW——对照处理产量（kg）； j——第j个参试品种（系）。 4.2.8 全生育期抗旱性评价标准 马铃薯全生育期抗旱性评价标准见表2。 表 2 马铃薯全生育期抗旱性评价标准 级别 抗旱指数（DRI） 抗旱性 1 DRI≥1.41 极强（HR） 2 1.03≤DRI<1.41 强（R） 3 0.51≤DRI<1.03 中等（MR） 4 0.14≤DRI<0.51 弱（S） 5 DRI≤0.14 极弱（HS） 5 使用规则 5.1 以育种和生产应用为目的马铃薯抗旱性鉴定，应采用全生育期抗旱性鉴定的方法。 5.2 以快速筛选遗传和生理方面为目的马铃薯抗旱性鉴定，应采用苗期抗旱性鉴定的方法。 _________________________________ 4 DB13/T 2828—2018 AA 附 录 A （规范性附录） 过氧化物酶（POD）活性测定 A.1 试剂 A.1.1 试剂 a) b) c) d) 磷酸氢二钠； 磷酸二氢钠； 愈创木酚； H2O2。 A.1.2 试剂配制 A液：0.2mol/L Na2HPO4，（Na2HPO4 ·2H2O 35.61g或53.65g Na2HPO4 ·7H2O或71.7g Na2HPO4 ·12H2O用 蒸馏水配成1000ml） B液：0.2mol/L NaH2PO4，（27.6g NaH2PO4·H2O用蒸馏水配成1000ml）31.2g NaH2PO4·2H2O 磷酸缓冲液(pH6.0，0.1mol/L)：A：B=12.3:87.7，混匀稀释至200ml 磷酸缓冲液(pH7.8，0.05mol/L)：A：B=91.5:8.5，混匀稀释至400ml A.2 仪器和设备 a) b) c) d) 微量进样器； 高速冷冻离心机； 分光光度计； 恒温水浴锅。 A.3 测定步骤 A.3.1 酶液制备 称取样品0.5g，加入2m1磷酸缓冲液(pH7.8，0.05mol/L)，冰浴研磨，再以3m1磷酸缓冲液分两次 冲洗残渣，一并转入10ml离心管中。0-4℃低温，12000rpm离心20min，离心后冷藏保存，酶液供丙二 醛、POD、CAT测定用。 A.3.2 过氧化物酶（POD）活性测定 A.3.2.1 反应混合液配制： 0.l mol/L磷酸缓冲液(pH6.0) 100m1，愈创木酚56μ l，加热搅拌至溶解， 冷却后，加入30%H2O2 38μ l，混匀，冰箱保存。 A.3.2.2 测定：取50μ l酶液，加入3m1反应混合液，以50μ l磷酸缓冲液(pH7.8)代替酶液作为空白， 470nm比色并计时，每隔lmin读一次(读0，1，2min的OD值)，以每分钟内OD470变化值表示酶活性大小。 5 DB13/T 2828—2018 A.3.2.3 结果计算：POD活性(U.min-l.g-1FW)=△A470×Vt/0.01×W×Vs×t。式中，△A470：反应时 间内吸光值的变化；Vt：提取酶液总体积(ml)；W：样品鲜重（g） ；Vs：测定时取用酶液体积(ml)；t： 反应时间(min) ；0.01：每分钟增加0.01为一个酶活单位。 6 DB13/T 2828—2018 BB 附 录 B （规范性附录） 过氧化氢酶（CAT）活性 B.1 试剂 B.1.1 试剂 a) b) c) 磷酸氢二钠； 磷酸二氢钠； H2O2。 B.1.2 试剂配制 a) b) A 液：0.2mol/L Na2HPO4， （Na2HPO4 ·2H2O 35.61g 或 53.65g Na2HPO4 ·7H2O 或 71.7g Na2HPO4 ·12H2O 用蒸馏水配成 1000ml） B 液：0.2mol/L NaH2PO4，（27.6g NaH2PO4·H2O 用蒸馏水配成 1000ml）31.2g NaH2PO4·2H2O 磷酸缓冲液(pH7.8，0.05mol/L)：A：B=91.5:8.5，混匀稀释至400ml 磷酸缓冲液(pH7. 0，0.05mol/L) ，A：B=61.0:39.0，混匀稀释至400ml B.2 仪器和设备 a) b) c) 微量进样器； 高速冷冻离心机； 紫外分光光度计。 B.3 测定步骤 B.3.1 酶液制备，同A3.1 B.3.2 过氧化氢酶（CAT）活性的测定 B.3.2.1 反应混合液配制：0.05mol/L磷酸缓冲液(pH7. 0)100m1，30% H2O