ICS 07.080 CCS A 40 中华人民共和国国家标准 GB/T 40267—2021 植物源产品中左旋多巴的测定 高效液相色谱法 Determination of Levodopa in plant derived products- High performance liquid chromatography 2021-05-21发布 2021-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 40267—2021 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口。 司、上海市计量测试技术研究院、深圳市计量质量检测研究院、中国计量大学、四川赛纳斯分析检测有限 公司、甘肃省商业科技研究所有限公司。 本文件主要起草人：李怀平、冯德建、宋航、吴微、周婕、张协光、叶子弘、许洋、洪霞、赵爱平、许俊妹、 史谢飞、周李华、周鑫魁、张雅芬、贾艳玲、夏文强、柴宗龙、罗进、马丽侠、杨国武、冯玉升。 GB/T 40267—2021 植物源产品中左旋多巴的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件描述了植物源产品中左旋多巴含量的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于蚕豆（ViciafabaL.），狗爪豆[Stizolobium cochinchinensis（Lour.）TangetWang」、 常春油麻藤（MucunasemperuirensHemsl.）等植物源干样品中左旋多巴含量的测定。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 原理 4 试样用2%（体积分数）盐酸溶液超声提取后，经反相色谱柱分离，紫外（或二极管阵列）检测器检 测，以保留时间定性，采用外标法定量。 5 试剂或材料 5.1试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1.1磷酸氢二钾（K,HPO·3H,O)：优级纯。 5.1.2盐酸(HCI)。 5.1.3磷酸(H,PO4)。 5.1.4甲醇(CH,OH)：色谱纯。 5.2溶液配制 5.2.12%（体积分数）盐酸溶液：取盐酸20mL，加水至1L。 5.2.210mmol/L磷酸氢二钾溶液：称取磷酸氢二钾2.3g，加水950mL溶解，加磷酸调节pH7.0，再 用水稀释至1L。 1 GB/T40267—2021 5.3标准品 左旋多巴标准品：纯度≥99%；分子式：CHnNO4；CAS号：59-92-7。 5.4标准溶液配制 5.4.1标准储备液：称取左旋多巴标准品约20mg（精确至0.1mg），用2%（体积分数）盐酸溶液溶解并 定容至10mL，配制成质量浓度为2000mg/L的左旋多巴标准储备液，于4℃下保存备用，有效期为 1个月。 5.4.2标准中间液：准确移取标准储备液2.5mL于100mL容量瓶中，用2%（体积分数）盐酸溶液稀 释定容，摇匀，配制成质量浓度为50.0mg/L的标准中间液。 5.4.3低浓度标准工作溶液：分别准确移取适量标准中间液，用2%（体积分数）盐酸溶液稀释配制成质 量浓度为0.500mg/L、1.25mg/L、2.50mg/L5.00mg/L、10.0mg/L、15.0mg/L、30.0mg/L的低浓 度标准工作溶液，现配现用。 量浓度为30.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L、500mg/L、700mg/L、1000mg/L的高浓度标 准工作溶液，现配现用。 5.5材料 微孔滤膜（水相）：孔径0.45μm。 6仪器设备 6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器（UV)或二极管阵列检测器（DAD)。 6.2分析天平：感量0.01mg和0.0001g。 6.3超声波发生器：功率250W，工作频率40kHz。 6.4离心机：转速不低于8000g。 6.5酸度计：精度为0.01个pH单位。 6.6涡旋混匀器。 6.7电动粉碎机。 7样品 取蚕豆、狗爪豆、常春油麻藤等样品约250g，用电动粉碎机粉碎，过355uμm土13um内径筛，混匀 制备好的试样均分成两份，装人洁净的盛样容器内，密封并标识，于室温、密封、避光保存。 8试验步骤 8.1试样处理 称取试样1g（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加人10mL2%（体积分数）盐酸溶液，涡旋 混勾后超声提取30min，间隔15min摇匀一次，然后在8000（×g）下离心5min，将上清液转移至 2