ICS 65.020.20 CCS B 16 黑龙江省地方标 准DB23 DB23/T 3896—2024 玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程 2024-12-30 发布 2025-01-29 实施 黑龙江省市场监督管理局 发布 DB23/T 3896—2024 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由黑龙江省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：黑龙江省农业科学院玉米研究所、东北农业大学、中国农业科学院作 物科学研究所。 本文件主要起草人：扈光辉、杨剑飞、朴琳、李永刚、李春辉、李国良、王明泉、付立 新、胡少新、王志国。 DB23/T 3896—2024 3 玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术规程 1 范围 本文件规定了玉米穗腐病抗源鉴定及评价技术的接种体制备、 抗病性鉴定圃设置、 接种、 病情调查和抗病性评价等要求。 本文件适用于玉米种质资源对玉米镰孢穗腐病的田间抗性鉴定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4404.1 粮食作物种子 第1部分：禾谷类 NY/T 1248.8 玉米抗病虫性鉴定技术规范 第8部分：镰孢穗腐病 DB23/T 2154 玉米机械化籽粒收获栽培技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 玉米穗腐病抗源鉴定 identification of resistanc e source to maize ear rot 利用玉米禾谷镰孢（ Fusarium graminearum ）、拟轮枝镰孢（ F verticillioides ）、亚粘团 镰孢（ F. subglutinans ）、层出镰孢（ F. proliferatum ）穗腐病混合菌进行人工接种，鉴定挖 掘抗穗腐病种质资源。 4 接种体制备 4.1 镰孢病原菌分离与致病力测定 4.1.1 病原菌分离 取发生穗腐病的玉米籽粒，置于 75%的酒精中浸泡 2 s～3 s，取出后置于浓度为 1.5%的 次氯酸钠中浸泡 3 min～5 min，再经无菌水换洗 3次，晾干后用无菌剪刀从中间剪开后将其 中一块组织转移至 PDA平板培养基上，置于 25 ℃～27 ℃环境中，黑暗培养 3 d后挑取病原 菌至试管中保存。 4.1.2 致病力测定 采用根部接种法根据柯赫氏法则验证所分离的镰孢菌为穗腐病原菌， 并确定其具有一定 的致病能力。 DB23/T 3896—2024 4 4.2 镰孢病原菌鉴定 采用形态学和分子生物学技术确定目标病原菌的所属种为禾谷镰孢、拟轮枝镰孢、亚粘 团镰孢、层出镰孢。具体鉴定方法按 NY/T 1248.8 的规定执行。 4.3病原菌的配制 4.3.1 培养基的制备 将高粱粒（ 125 g）在沸水中煮 20 min，然后转移到 250 mL三角瓶中， 121 ℃湿热灭菌 45 min，完成高粱粒培养基的制备。 按照 NY/T 1248.8 提供的方法制备马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ Potato dextrose agar medium，PDA）。 4.3.2 禾谷镰孢孢子悬浮液的配制 将禾谷镰孢转移至 PDA培养基上培养，挑取 3个～ 5个扩繁的禾谷镰孢的菌碟转移到 0.9%～1.5%的无菌盐水中， 每100 mL三角瓶装液量为 15 ml，28 ℃～30 ℃、可见光 150 lx～ 200 lx条件下摇床震荡（ 150 rpm～180 rpm）培养 96 h～120 h，双层纱布过滤后用血球计数 法调整孢子悬浮液浓度为 2×10 6孢子 /mL，4℃条件下可保存 96 h。 4.3.3 拟轮枝镰孢孢子悬浮液的配制 将PDA培养基扩繁 7 d后的拟轮枝镰孢 5个菌碟转移至装有无菌高粱粒的三角瓶中， 并在 26 ℃、避光条件下培养 5 d，每天摇晃一次三角瓶，然后用无菌水冲洗带菌高粱粒，双 层纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬浮液浓度为 2×106孢子 /mL，4 ℃条件下可保存 96 h。 4.3.4 亚粘团镰孢孢子悬浮液的配制 将PDA培养基扩繁 7 d后的亚粘团镰孢 5个菌碟转移至装有无菌高粱粒的三角瓶中， 并在 26 ℃、避光条件下培养 5 d，每天摇晃一次三角瓶，然后用无菌水冲洗带菌高粱粒，双 层纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬浮液浓度为 2×106孢子 /mL，4 ℃条件下可保存 96 h。 4.3.5 层出镰孢孢子悬浮液的配制 将PDA培养基扩繁 7 d后的层出镰孢 5个菌碟转移至装有无菌高粱粒的三角瓶中，并 在26 ℃、避光条件下培养 5 d，每天摇晃一次三角瓶，然后用无菌水冲洗带菌高粱粒，双层 纱布过滤后用血球计数法调整孢子悬浮液浓度为 2×106孢子 /mL，4 ℃条件下可保存 96 h。 4.3.6 混合孢子悬浮液配制 将禾谷镰孢、拟轮枝镰孢、亚粘团镰孢、层出镰孢按照 4:2:1:0.5 体积比将各镰孢菌孢子 悬浮液混合， 4 ℃条件下可保存 48 h。 5 抗病性鉴定圃设置 5.1 鉴定圃设计 鉴定圃应具有良好的自然发病环境，可根据需要进行排灌。 鉴定种质资源按照晚熟、中熟、早熟 3个熟期分区种植，各熟期内种质资源采取随机排 列，每隔 30行鉴定材料设置 1组已知同熟期抗病、感病对照。对照见附录表 A.1。