GB 31660.4—2019 2019 -09-06发布 2020 -04-01实施 食品安全国家标准 动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕 酮残留量 的测定 液相色谱 -串联质谱法 National food safety standard - Determination of megestrol acetate and medroxyprogesterone acetate residues in animal derived foods by liquid chromatography -tandem mass spectrometry 发布 GB31660.4—2019 前 言 本标准系首次发布。GB31660.4—2019 1 食品安全国家标准 动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量 的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本标准规定了动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留检测的制样和 液相色谱 - 串联质谱测定方法。 本标准适用于猪、牛、羊肌肉、脂肪、肝脏、肾脏和牛奶中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕 酮残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件， 其最新版本 （包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中残留的醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮经 乙腈提取，正己烷 除脂，混合 阳离子柱净 化，甲醇洗脱 ，液相色谱 -串联质谱法测定， 内标法定量。 4 试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH 3CN）：色谱纯。 4.1.2 甲醇（CH 3OH）。 4.1.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。 4.1.4 乙酸（CH 3COOH）。 4.1.5 正己烷（C6H14）。 4.1.6 乙酸乙酯 （CH 3COOC 2H5）。 4.1.7 乙酸铵（CH 3COONH 4）。 4.2 溶液配制 GB31660.4—2019 2 4.2.1 0.2mol/L 乙酸铵缓冲液： 取乙酸铵 15.4g， 加水 900ml使溶解， 用乙酸调 pH值至 5.2， 加水稀释至 1000mL。 4.2.2 2% 甲酸水溶液：取甲酸 2mL，加水溶解并稀释至 100 mL。 4.2.3 0.1% 甲酸水溶液：取甲酸 1mL，加水溶解并稀释至 1000 mL。 4.2.4 50% 甲醇水溶液：取甲醇 50mL，加水溶解并稀释至 100 mL。 4.2.5 30% 甲醇水溶液：取甲醇 30mL，加水溶解并稀释至 100 mL。 4.2.6 0.1% 甲酸水乙腈溶液：取 0.1%甲酸水溶液 20mL，加乙腈溶解并稀释至 100 mL，混 匀。 4.3 标准品 4.3.1 醋酸甲地孕酮（ Megestrol acetate,C 24H32O4,CAS:595 -33-5）、醋酸甲羟孕酮 （Medroxyprogesterone acetate,C 24H34O4,CAS:71 -58-9），含量均≥98.0%。 4.3.2 内标：氘代醋酸甲地孕酮（ megestrol acetate -D3,C24H29D3O4），含量≥98.0%。 4.4 标准溶液制备 4.4.1 标准贮备液： 取醋酸甲地孕酮、 醋酸甲羟孕酮标准品各约 10mg， 精密称定， 于 100mL 棕色量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 0.1 mg/mL 的醋酸甲地孕酮、醋酸甲 羟孕酮标准贮备液。 -20℃保存，有效期 6个月。 4.4.2 内标贮备液：取氘代醋酸甲地孕酮 标准品约 10mg，精密称定，于 100 mL棕色量瓶 中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成 0.1mg/mL 的氘代醋酸甲地孕酮贮备液。 -20℃保存， 有效期为 6个月。 4.4.3 混合标准工作液：精密量取醋酸甲地孕酮 、醋酸甲羟孕酮标准贮备液各 0.5 mL，于 50 mL棕色量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度 均为1 µg/mL混合标准工作液。 4℃以 下避光保存，有效期 1个月。 4.4.4 内标工作液：精密量取 内标贮备液 0.5 mL，于 50 mL棕色量瓶中，用乙腈稀释至刻 度，配制成浓度为 1µg/ mL的内标标准工作液。 4℃以下避光保存，有效期 1个月。 4.4.5 标准曲线的制备 精密量取适量混合标准工作液及 内标标准工作液 ，用流动相稀释配 制成浓度为２、 5、25、 50、100 ng/mL 的系列标准溶液（内标均为 20 ng/mL ）。以特征离子质量色谱峰面积比为纵 坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。 4.5 材料 4.5.1 混合阳离子固相萃取柱： 60 mg/3 mL ，或相当者。 4.5.2 β-盐酸葡萄糖醛苷酶 /芳基硫酸酯酶。 4.5.3 微孔滤膜： 0.22 µm。 5 仪器和设备