说明:收录25万 73个行业的国家标准 支持批量下载
文库搜索
切换导航
文件分类
频道
联系我们
问题反馈
文件分类
联系我们
问题反馈
批量下载
ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T 40183—2021 DNA甲基化的测定 焦磷酸测序法 Determination of DNA methylationPyrosequencing 2021-12-01实施 2021-05-21发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 40183—2021 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位:河北医科大学、中国标准化研究院、河北省食品检验研究院、中国科学院遗传与发 育生物学研究所农业资源研究中心、河北师范大学。 本标准主要起草人:吕品、马爱进、张岩、林浩、李永鹏、李东明、黄芸、杨宏超。 GB/T 40183—2021 DNA甲基化的测定 焦磷酸测序法 1范围 本标准规定了用焦磷酸测序法测定DNA甲基化的方法。 本标准适用于动植物组织或体外培养细胞DNA甲基化测定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义、缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 DNA甲基化 DNAmethylation 在DNA甲基转移酶的催化下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移至碱基特定结构上的 过程。 3.2缩略语 SAC 下列缩略语适用于本文件。 DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid) PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction) 4 原理 DNA经重硫酸盐硫化处理后,DNA双链中未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,通过PCR将尿嘧啶 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1水:GB/T6682,二级水。 5.2 动物基因组DNA提取试剂盒 5.3 植物基因组DNA提取试剂盒。 5.4 20pmol/μL焦磷酸测序用引物。 5.5 PCR试剂盒。 1 GB/T40183—2021 5.6 DNA重亚硫酸盐快速转化试剂盒, 5.7焦磷酸测序试剂盒。 5.870%(体积分数)乙醇。取70mL无水乙醇加水稀释定容至100mL 5.9溴化乙锭溶液。称取1g溴化乙锭加水稀释定容至100mL,磁力搅拌至完全溶解,然后将溶液保 存于棕色瓶中,室温保存。 0.5mol/L乙二胺四乙酸溶液(pH8.0),再加蒸馏水定容至1000mL,室温保存,稀释50倍使用 5.112%(质量分数)琼脂糖凝胶。称取2g琼脂糖置于烧瓶中,加入100mL电泳缓冲液,加热使琼脂 糖充分溶解,适当冷却,然后加入7uL溴化乙锭溶液,混匀,将其缓慢地倒人放有梳子的制胶槽中,室温 放置待琼脂糖凝固后拔下梳子,取出凝胶,4℃密封保存备用。 5.126X电泳加样缓冲液。称取0.25g溴酚蓝、40g蔗糖置于100mL烧杯中,加蒸馏水至完全溶解 后定容至100mL。 5.130.5mol/L乙二胺四乙酸溶液。称取18.61g乙二胺四乙酸二钠二水合物,加人80mL水,充分 搅拌,用氢氧化钠调pH至8.0,然后定容至100mL。 5.14标准相对分子质量DNA(100bp~2000bp)。 6仪器设备 6.1 分析天平:感量0.001g。 6.2离心管:1.5mL和2mL。 6.3 PCR 仪。 6.4水平电泳槽。 6.5电泳仪。 6.6低温离心机:最大离心力25910g。 6.7凝胶成像系统。 6.8核酸检测仪。 6.9焦磷酸测序仪。 6.10 PCR管。 7测定步骤 7.11 DNA提取 按照动物或植物基因组DNA提取试剂盒说明进行提取。 7.2 2DNA重亚硫酸盐转化 按照DNA重亚硫酸盐快速转化试剂盒说明进行操作。 7.3甲基化PCR扩增目的片段 7.3.1PCR反应体系 配制50μLPCR反应体系:以10ng~20ng重亚硫酸盐转化后的DNA溶液为模板,按照PCR试 剂盒说明加人试剂,再加入焦磷酸测序引物对中的上下游引物各0.5uL,用水补足体积至50μL。在 PCR仪上扩增。 2 GB/T 40183—2021 7.3.2PCR扩增产物电泳检测 示剂迁移至凝胶中部;用凝胶成像系统观察电泳结果并记录;电泳检测合格的PCR产物用于测序 7.4焦磷酸测序 利用焦磷酸测序仪及焦磷酸测序试剂盒进行以下操作:在焦磷酸测序仪配套软件中生成运行程序 PCR产物和3μuL焦磷酸测序测序仪配套的磁珠,运行焦磷酸测序仪程序,导出结果。 3结果分析 8 使用焦磷酸测序仪将运行后的数据拷贝到电脑中,打开软件并载人运行后的文件,选择CpG模式, 对每个样本的焦磷酸测序结果进行分析,结果中所测位点处显示的百分数即为该位点甲基化的比例。 SZG GB/T 40183—2021 7.3.2PCR扩增产物电泳检测 示剂迁移至凝胶中部;用凝胶成像系统观察电泳结果并记录;电泳检测合格的PCR产物用于测序 7.4焦磷酸测序 利用焦磷酸测序仪及焦磷酸测序试剂盒进行以下操作:在焦磷酸测序仪配套软件中生成运行程序 PCR产物和3μuL焦磷酸测序测序仪配套的磁珠,运行焦磷酸测序仪程序,导出结果。 3结果分析 8 使用焦磷酸测序仪将运行后的数据拷贝到电脑中,打开软件并载人运行后的文件,选择CpG模式, 对每个样本的焦磷酸测序结果进行分析,结果中所测位点处显示的百分数即为该位点甲基化的比例。 SZG GB/T 40183—2021 7.3.2PCR扩增产物电泳检测 示剂迁移至凝胶中部;用凝胶成像系统观察电泳结果并记录;电泳检测合格的PCR产物用于测序 7.4焦磷酸测序 利用焦磷酸测序仪及焦磷酸测序试剂盒进行以下操作:在焦磷酸测序仪配套软件中生成运行程序 PCR产物和3μuL焦磷酸测序测序仪配套的磁珠,运行焦磷酸测序仪程序,导出结果。 3结果分析 8 使用焦磷酸测序仪将运行后的数据拷贝到电脑中,打开软件并载人运行后的文件,选择CpG模式, 对每个样本的焦磷酸测序结果进行分析,结果中所测位点处显示的百分数即为该位点甲基化的比例。 SZG
GB/T 40183-2021 DNA甲基化的测定 焦磷酸测序法
文档预览
中文文档
5 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助2元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共5页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助2元下载
本文档由 SC 于
2022-10-04 15:46:06
上传分享
举报
下载
原文档
(588.3 KB)
分享
友情链接
T-CHIA 14.5—2018 医疗健康物联网 感知设备通信数据命名表 第5部分:血压计.pdf
GB-T 14728.2-2008 双臂操作助行器具 要求和试验方法 第2部分:轮式助行架.pdf
GB-T 32904-2016 软件质量量化评价规范.pdf
GB-T 33200-2016 社会治安综合治理 综治中心建设与管理规范.pdf
GB-T 27912-2011 金融服务 生物特征识别 安全框架.pdf
GB-T 39412-2020 信息安全技术 代码安全审计规范.pdf
GW0206-2014 国家电子政务外网 接入政务外网的局域网安全技术规范.pdf
GB-T 1457-2022 夹层结构滚筒剥离强度试验方法.pdf
GB-T 1236-2017 工业通风机 用标准化风道性能试验.pdf
GB-T 7344-2015 交流伺服电动机通用技术条件.pdf
GB-T 24420-2009 供应链风险管理指南.pdf
GB-T 38647.2-2020 信息技术 安全技术 匿名数字签名 第2部分:采用群组公钥的机制.pdf
GB-T 23981.2-2023 色漆和清漆 遮盖力的测定 第2部分:黑白格板法.pdf
GB-T 34590.1-2022 道路车辆 功能安全 第1部分:术语.pdf
GB-T 19890-2005 声学 高强度聚焦超声(HIFU)声功率和声场特性的测量.pdf
T-TAF 075.2—2020 支持北斗的移动通信终端定位技术要求及测试方法 第2部分:控制面协议一致性.pdf
GB-T 42569-2023 工业互联网平台 开放应用编程接口功能要求.pdf
GB-T 23237-2009 腧穴定位人体测量方法.pdf
DB32-T 4144-2021 公共信用信息平台运行维护管理规范 江苏省.pdf
DB32-T 4664-2024 涉危险化学品生产企业特种设备双重预防机制建设实施规范 江苏省.pdf
交流群
-->
1
/
3
5
评价文档
赞助2元 点击下载(588.3 KB)
回到顶部
×
微信扫码支付
2
元 自动下载
官方客服微信:siduwenku
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。