ICS 65. 020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28097—2011 苹果黑星病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Venturia inaequalis (Cooke) Wint. 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 28097—2011 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国安徽出人境检验检疫局、安徽农业大学，中华人民共和国云南出 入境检验检疫局。 本标准主要起草人：姚剑、檀根甲、温劲松、余晓峰、张萍、李刚、郑海松、李云飞、方元炜、张道环、 李牛贵、段禄华。 GB/T28097—2011 苹果黑星病菌检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了苹果黑星病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于苹果属果树、果实、种苗及其他材料的检疫和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3苹果黑星病菌基本信息 中文名：苹果黑星病菌。 学名： 有性型：Venturia inaequalis（Cooke）Wint。 无性型：SpilocaeapomiFr.。 病害英文名：applescab，blackspot。 异名： 有性型:Sphaeria cinerascens Fr. Sphaerella cinerascens Fuck. Sphaerella inaequalis Cooke. Endostigme inaequalis (Cooke) Syd. Spilosticta inaequalis (Cooke)Petr. Endostigme cinerascens (Fleisch) Jorst. 无性型.Fusicladiumdendriticum（Wallr.)Fuck. Claporium dendriticum Wallr. 根据《真菌词典》第九版（2oo1），有性型属真菌界Fungi，子囊菌门Ascomycota，子囊菌纲Ascomy- cetes，座囊菌亚纲Dothideomycetidae，格孢腔菌目Pleosporales，黑星菌科Venturiaceae，黑星菌属Ven turia 无性型属环黑星孢属Spilocaea，仁果环黑星孢SpilocaeapomiFr.（一Fusicladiumdendriticum (Wallr.)Fuck.)。 苹果黑星病菌的其他信息参见附录A。 4方法原理 判定。 1 GB/T280972011 5仪器及用具 5.1仪器 显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、牛物培养箱。 5.2用具 解剖刀、镊子。 6试剂和培养基 6.1试剂 4%次氯酸钠，70%酒精。 6.2培养基 PDA培养基，pH值调节至5.5~6.5。 7现场检验 7.1抽样方法 按SN/T2122进行抽样。 7.2症状检查 逐一对抽检样品进行症状检查，并将疑似感病样品带回实验室作进一步检验， 7.2.1叶片检查 叶片上病斑多先从叶片正面发生。病原菌从侵人点放射状扩展，形成病斑。叶片正面病斑初为淡 黄绿色，色泽逐渐变深，后变为黑色，圆形、近圆形，直径3mm～6mm或更大，病斑周围有明显的边缘， 老叶上尤甚。幼叶病斑多表面粗糙羽毛状，成叶病斑边缘明显而不整齐，有时表生白色棉絮状物。病斑 多由叶片正面向上突起，其背面形成环状凹入，呈泡斑状，有时病斑脱落穿孔。叶背面侵染形成的病斑 略成圆形，表生黑褐色霉状物，叶片正面对应部位褪绿，枯死。侵染较晚的，仅在叶片背面产生黑色多角 形病斑。叶片上病斑可互相汇合，占据大部叶面，叶片扭曲、卷曲，进而干枯并早期落叶。 在叶柄和主叶脉上的病斑黑色，较小，小点状、梭形或长条形，往往导致叶片变黄脱落。 7.2.2花器检查 发病花瓣褪色，萼片上生灰色病斑，但常被萼片绒毛覆盖，不易察觉。花梗上病斑还可环切花梗，造 成落花。 SAG 7.2.3果实检查 果实从幼果至成熟期均可被侵染，果面病斑初为黑色星状斑点，很小、微凸，上生有绒状菌丝体。随 着果实膨大，病斑逐渐扩大并凹陷，表层木栓化，边缘开裂，有不规则细小裂纹，整体疮痴状。病果开裂、 畸形。在秋季被侵染的果实，病面密生黑色或褐色小点，不表现典型症状，但在贮藏期病斑逐渐扩大。 2 GB/T28097—2011 7.2.4苗木、接穗等繁殖材料检查 1年生枝条被侵染，常发生在离枝端大于10cm的部位，病斑较小，枝条长大后，病斑消失，但在一 些感病的品种上，病斑并不消失，使病枝呈泡肿状。另外，芽鳞内也有越季存活的菌丝体或分生孢子。 8实验室检测 8.1切片检测 选取疑似感病植物组织病健交界处切片，移于载玻片中央的水滴中，镜检，观察子实体特征。 8.2分离培养检测 选取疑似感病植物组织，剪取病健交界处组织若干小块，约2mm×2mm，在70%酒精中浸湿一下 后立即移入4%次氯酸钠中消毒处理1min，用无菌水洗3次，放于PDA平板培养基上，每皿5块，置于 16℃～20℃，光照强度为6001x、光周期为12h条件下培养。观察病菌形态特征。 9鉴定特征 9.1病菌形态特征 苹果黑星病菌有性型Venturia inaequalis（Cooke）Wint.子囊座在落叶上形成，埋生或近表生叶肉 组织中，黑褐色，球形、近球形，直径约90μm～100μm，孔口处稍有乳状突起，具刚毛，刚毛长25μm～ 75μm。子囊座内产生多数子囊，处于不同发育阶段。子囊长棍棒形，无色，大小（55μm～75μm）× 小,基部细胞较大，大小（11 μm～15μm）×（4 μm～8μm）。无性型Fusicladium dendriticum （Wallr.）Fuck.分生抱子梗丛生、淡褐色至橄榄色，短棒状，直立或弯曲，不分枝，单胞，0个2个隔膜， 状，顶端略尖，初无色，淡褐色至橄榄色，初单胞，后生1个隔膜，隔膜处稍缢缩，孢基平截，表面光滑或具 小疣突，大小(12.0μm～26.0μm）×（5.5μm～11.5μm）。分离培养的分生孢子比切片观察的略大 (参见附录B)。 9.2病菌培养性状 菌株在PDA培养基上培养4d后，开始形成灰白色菌落。4周后，菌落呈不规则形或圆形，直径约 20mm，平铺状，橄榄色、灰色或黑色，有时被茸毛。菌丝初无色，后变为橄榄色。 9.3与梨黑星病菌Venturiapirina（Cooke）Adh.的区别 梨黑星病菌有性型孢子囊棍棒形，子囊孢子顶细胞较大，基部细胞较小；无性型分生孢子梗罕见有 隔膜，梗壁上有齿状或疣状突起，分生孢子单孢，两端略尖（参见附录C）。 10结果判定 如有7.2.1～7.2.4描述中任一症状，且切片或分离培养观察的病菌形态特征与描述的病原有性型 或无性型特征相符，可判定为苹果黑星病菌。 3