ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 28091—2011 剑线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 Detection and identification of Xiphinema spp.as virus vectors 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 28091—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口。 测所。 本标准主要起草人：张卫东、郑经武、廖力、蒋立琴、张燕、郭恺、陈其文、乐海洋、徐淼锋、迟远丽、 吴长坤、彭仁， I GB/T 28091—2011 剑线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了剑线虫属传毒种类的检疫鉴定方法。 本标准适用于植物根系、土壤及栽培介质中剑线虫属传毒种类的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T24830拟毛刺线虫属（传毒种类）检疫鉴定方法 SN/T1157进出境植物苗木检疫规程 SN/T 1158 进出境植物盆景检疫规程 3剑线虫属（传毒种类）基本信息 中文名：剑线虫属（传毒种类）。 学名：Xiphinema app.。 英文名:virus vectors species of Dagger nematode。 剑线虫属传毒种类隶属于线虫门Nematoda（Rudolphi，1808）Lankester1877、无侧尾腺纲Ade nophoreaLinstow，1905，矛线目DorylaimidaPearse，1942、长针线虫科Longidoridae（Thorne，1935） Filipjev,1934剑线虫属XiphinemaCobb,1913。 剑线虫传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫，主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等寄主 植物材料的调运传播。 剑线虫属（传毒种类）的其他信息参见附录A。 4方法原理 将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株，送实验室经漏斗法或浅盘法分离获得线虫，制成临时 或永久玻片，显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据，依据本标准描述的剑线虫属传毒 种类形态鉴定特征与其基本生物学信息，按系统分类学方法，鉴定其生物学种类。 5仪器和用具 仪器和用具按GB/T24830执行。 6试剂 试剂按GB/T24830执行，分样筛选用300目 1 GB/T28091—2011 7现场检测 对苗木、球茎等寄主材料进行检查，注意观察苗木的生长状况、根部为害状，以及是否带介质、土境 等。重点选取植株矮化、萎缩，根部肿大、粗短、畸形，侧根丛生等症状的苗木及根际介质或王壤，如无可 疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋，标记后及时送实验室检测 具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。 8实验室检测 8.1线虫分离 线虫分离按GB/T24830执行。 8.2体视显微镜镜检 分离获得的水样在10倍以上体视显微镜检查，观察线虫的形态结构。 8.3标本制作 标本制作按GB/T24830执行。 8.4生物显微镜观察、摄影和测量 应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影，重点包括整体形态、头区轮廓、齿尖针、尾部形 态、雌虫生殖系统及雄虫交合刺等，并在每张图片上加相应标尺，测量并计算α、b、c和V等值 9 形态鉴定特征 9.1剑线虫属形态鉴定特征 9.1.1雌虫 虫体细长，热杀死后虫体直或腹弯或呈“C”形、开螺旋形。头部圆、连续或缢缩；侧器口宽裂缝状， 侧器囊倒马形或漏斗形；齿尖针细长、针状、高度硬化，齿尖针基部呈叉状，齿托基部呈显著的凸缘状； 齿针导环为双环、后环高度硬化，导环位于齿尖针后部靠近齿尖针与齿托相连接处；背食道腺核位于背 食道腺开口附近、大于腹亚侧腺核。雌虫生殖腺有4种类型：前后生殖腺均发育完全的双生殖腺型、前 生殖腺退化但结构尚完整的双生殖腺型、前生殖腺退化且结构不完全的假单生殖腺型和无前生殖腺的 单生殖腺型等，有些种类的子宫内有骨化结构。尾部形态多样：短，半球形、有或无1个指状尾突，圆锥 形，前部圆锥形后部渐变细成丝状等。 9.1.2雄虫 雄虫（有些种至今未发现）体长、形态、头部、口针、食道和尾形的特征均似雌虫，双生殖腺、对伸，交 合刺矛线型、粗壮、有侧附导片，斜纹交配肌发达、由泄殖腔向前延伸，泄殖腔区有1对交配乳突，其前一 段距离有1列腹中交配乳突（最多7个）。 9.2剑线虫属传毒种类的形态鉴定特征 剑线虫属传毒种类形态鉴定特征参见附录B和附录C。 2 GB/T 28091—2011 9.2.1美洲剑线虫（X.americanumCobb，1913） 雌虫虫体细长（1.4mm～1.7mm），形成一个开阔的螺旋形；唇区半球形、轻微膨胀；齿尖针中空， 长约为72μm，基部分叉；齿托有凸缘，长约为45μm～47μm；双生殖腺，在输卵管处回折，子宫伸长， 窄、内无特殊分化结构；尾呈圆锥形，背面有一大弯，末端半球形，末端角质层无盲管。雄虫极少，虫体与 雌虫相似，但后三分之一部分比雌虫弯曲更大；精巢成对，伸展而对称；交合刺很直，骨化，长为29μm。 9.2.2贝克剑线虫（X.bakeriWilliams，1961) 长，齿针和齿托部之和超过200um；阴门位置较前，双卵巢，两侧生殖系统结构完整，长度相同或儿乎相 同，无子宫分化；尾短圆锥形，末端有一指状突。雄虫极少发现。 9.2.3拜西尔剑线虫（X.basiriSiddiqi,1959） 雌虫虫体细长（2.9mm～3.5mm），弯曲成钩状或螺旋形；唇区轻微缢缩，齿尖针和齿托长度分别 为120um～132um和54um~70um；生殖腺成对，两侧生殖系统结构完整，长度相同或儿乎相同，子 宫存在假“乙”字形结构；尾短圆锥形，未端有一明显指状突。雄虫稀少。 9.2.4 X.brevicollum Lordello,1961 雌虫虫体细长（1.8mm～2.2mm），弯曲呈螺旋形或钩状；唇区与体壁不连续，缢缩；齿尖针和齿托 官；尾短圆锥形或半圆形，背面呈一个突圆形的大弯，腹面呈指状，尾尖钝圆。 9.2.5加州剑线虫（X.californicumLamberti，1979） 形的大弯，腹面呈指状，尾尖圆锥形，末端角质层无盲管。 9.2.6考克斯剑线虫（X.coxiTarjan，1964） 雌虫虫体细长（3.1mm~4.0mm），热杀死后呈“C”字形；唇区轻微缢缩，齿尖针和齿托长度分别 为113μm~127μm和68μm～82μm；双生殖腺，两侧生殖系统结构完整，长度相同或几乎相同，子宫 存在假“Z”字形结构；尾短圆锥形，末端有一指状突。雄虫稀少。 9.2.7裂尾剑线虫（X.diversicaudatumMicoletzky，1927) 雌虫虫体细长（4.0mm～5.5mm），热杀死后体弯曲；唇区扁，光滑，缩；齿尖针平均长度为 143μm；双卵巢，折叠，两侧生殖系统结构完整，长度相同或几乎相同，每个子宫有一个明显的假“Z”字 形器官；尾部尾短圆锥形，末端有一指状突。雄虫虫体与雌虫类似，齿尖针长134um，基部有分叉，齿托 长75μm，导环距齿针尖前端125μm；交合刺强大，中央弯曲，长度为75μm，侧引带15μm。 9.2.8标准剑线虫（X.indexThorn，1950） 齿尖针中空，平均长度为126μm，基部分叉与齿托形成牢固的连接，齿托长约为70um，有3个大的凸 圆锥形至半圆形，末端有圆形或半圆形指状突，背面呈一个突圆形的大弯，腹面呈指状。雄虫数量极少， 3