说明:收录25万 73个行业的国家标准 支持批量下载
文库搜索
切换导航
首页
频道
批量下载
联系我们
问题反馈
投诉渠道
商务合作
注册会员
首页
批量下载
联系我们
问题反馈
投诉渠道
商务合作
注册会员
批量下载
ICS 65.020.30 B 43 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T258762010 牛早期胚胎性别的鉴定 巢式 PCR 法 Method of nested PCR for sex identification of early cattle embryo 2011-01-10发布 2011-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 25876—2010 前言 本标准的附录B为规范性附录,附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:华中农业大学。 本标准主要起草人:张淑君、杨利国、李翔、刘辉、刘文举、胡修忠。 1 GB/T 25876—2010 牛早期胚胎性别的鉴定 巢式 PCR 法 1 范围 本标准规定了牛早期胚胎性别鉴定的巢式PCR方法。 本标准适用于奶牛和肉牛胚胎或胎儿的性别鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 巢式 PCR nestedpolymerasechainreaction 利用两套PCR引物(巢式PCR引物对)进行两轮PCR扩增反应,在第一轮扩增中,外引物用以产 生扩增产物,此产物在内引物的存在下,作为DNA模板,进行第二轮扩增。 3. 2 SRY基因 SRY gene 哺乳动物Y染色体上决定雄性性别的基因。 3.3 HBB gene HBB基因 β珠蛋白基因,位于常染色体上。 4原理 利用巢式PCR反应的敏感性高和特异性强的特性,对少量胚胎细胞的SRY基因片段进行扩增,以 HBB基因的扩增作为阳性参照,电泳检测PCR扩增产物,根据扩增产物电泳条带鉴定胚胎性别。 5引物 SRY1 5'CTACTCCCCAACCGTCAGAAC 3' 5'AGCCCAAACCCATCAACCTA3 SRY2 5'CCAGGGAACTGCTTGGGTA 3' 5'TGCTTCTCCACTTAGGCTCAA 3 HBB 5'TATCCCACTTACAAGGCAGGTT 3' 1 GB/T25876—2010 5'GCAGACAACAGAGAACAAGAATGA 3 6试剂和仪器 6.1主要试剂 水应符合GB/T6682中灭菌双蒸水的要求。 TaqDNA聚合酶及PCR缓冲液、1oobp梯度DNA标记物 TE缓冲液、TAE缓冲液、加样缓冲液、溴化乙锭等。具体制备方法参见附录A。 6.2主要仪器 冷冻离心机、梯度PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、pH计、电子天平、恒温水浴锅、双蒸馏水器、微 量移液器。 7检测方法 7.1试样的制备与保存 从待检胚胎中分离4个(或4个以上)细胞,用无菌超纯水冲洗3次后,放人0.5mLPCR管中,加 上清液保存于4℃冰箱中备用。 7.2SRY基因片段PCR扩增 第一次扩增体系为20μL:0.8mmol/L的dNTP、2U的TaqDNA聚合酶、0.2μmol/L的SRY基 因外引物SRY1和内参照引物HBB、10XPCR缓冲液、2.5mmol/L的氯化镁,加适量双蒸水;反应程 10 min,4℃保温2min~10 min。 取第一次PCR扩增产物8μuL,作为第二次扩增模板,同时加人10XPCR缓冲液、2.5mmol/L的 氯化镁、0.8mmol/L的dNTP1.6μL,2U的TaqDNA聚合酶、0.2μmol/L的SRY基因内引物 SRY2和内参照引物HBB、适量的双蒸水至20μL;反应程序为95℃预变性5min,94℃变性30s, 7.3结果判定 取5μLPCR扩增产物,1.0%~1.5%琼脂糖凝胶电泳(3V/cm~5V/cm,电泳20min~30min), 溴化乙锭染色,凝胶成像系统检查,电泳图谱见附录B中的图B.1。 电泳图谱中出现558bp(HBB扩增产物)和219bp(SRY扩增产物)条带,判定为雄性胚胎;电泳图 谱中只出现558bp条带,判定为雌性胚胎。 2 GB/T25876—2010 附 录 A (资料性附录) 试剂和材料 表A.1 试剂和材料 试剂 配方 TE缓冲液 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8. 0),1 mmol/L EDTA(pH 8. 0) 10XPCR缓冲液 200mmol/LTris-HCl(pH8.4),200mmol/L氯化钾,100mmol/L硫酸铵,15mmol/L氯化镁 242.28gTris碱,57.1mL冰乙酸100mL0.5mol/LEDTA(pH8.0),加双蒸水定容至 琼脂糖电泳缓冲液 1000mL,使用时50倍稀释 加样缓冲液 0.25%溴酚蓝(质量浓度),40%蔗糖(质量浓度)。 溴化乙锭 100mL双蒸水中加人0.1g漠化乙锭,搅拌使完全溶解,转人棕色试剂瓶,锡箔包裹、备用
GB-T 25876-2010 牛早期胚胎性别的鉴定 巢式PCR法
文档预览
中文文档
6 页
50 下载
1000 浏览
0 评论
0 收藏
3.0分
赞助2元下载(无需注册)
温馨提示:本文档共6页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
下载文档到电脑,方便使用
赞助2元下载
本文档由 思安 于
2023-02-06 17:30:26
上传分享
举报
下载
原文档
(627.0 KB)
分享
友情链接
DB44-T 2328-2021 慢性肾脏病中医健康管理技术规范 广东省.pdf
T-AHPCA 021—2021 聚乳酸可降解口罩.pdf
GB-T 28671-2012 制药机械 设备 验证导则.pdf
GB-T 14926.3-2001 实验动物 耶尔森菌检测方法.pdf
GB-T 18488.2-2015 电动汽车用驱动电机系统 第2部分:试验方法.pdf
T-CAS 600—2022 经营者公平竞争合规管理体系建设.pdf
GB-T 3286.11-2022 石灰石及白云石化学分析方法 第11部分:氧化钙、氧化镁、二氧化硅、氧化铝及氧化铁含量的测定 波长色散X射线荧光光谱法(熔铸玻璃片法).pdf
GB-T 3220-2011 集装箱吊具.pdf
6-02-06-03 白酒酿造工.pdf
GB-T 37319-2019 电梯节能逆变电源装置.pdf
T-CESA 1149—2021 人工智能芯片应用 面向病理图像分析辅助诊断系统的技术要求.pdf
GB/Z 28828-2012 信息安全技术 公共及商用服务信息系统个人信息保护指南.pdf
GB 35373-2017 氢氟烃类灭火剂.pdf
GB-T 33574-2017 集装箱生产序列号编码.pdf
T-CPIA 0047—2022 光伏柔性支架设计与安装技术导则.pdf
LY-T 3104-2019 沟眶象和臭椿沟眶象防治技术规程.pdf
T-ACEF 104—2023 公民绿色低碳行为温室气体减排量化指南 行:步行.pdf
GB-T 20319-2017 风力发电机组 验收规范.pdf
GB-T 32841-2016 金矿石取样制样方法.pdf
GB-T 4864-2008 金属钙及其制品.pdf
1
/
3
6
评价文档
赞助2元 点击下载(627.0 KB)
回到顶部
×
微信扫码支付
2
元 自动下载
官方客服微信:siduwenku
支付 完成后 如未跳转 点击这里 下载
售后交流群
本文档由网友分享,版权归原作者,如有侵权请随时联系我们
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们
微信(点击查看客服)
,我们将及时删除相关资源。