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ICS 71.040.30 G 66 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T 32226—2015 果糖二磷酸钠(FDP)含量测定用 固体复合酶(ALD、TIM、GDH)试剂 Specific solid enzyme (ALD, TIM, GDH)reagent for determination of fructose diphosphate (FDP) 2015-12-10发布 2016-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T32226—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国生化检测标准化技术委员会(SAC/TC387)提出并归口。 本标准起草单位:中国测试技术研究院、北京众宜隆润科技有限公司。 本标准起草人:谭和平、赵军、周李华、张莉莉、孙登峰、王晓平、叶德萍。 I GB/T32226—2015 果糖二磷酸钠(FDP)含量测定用 固体复合酶(ALD、TIM、GDH)试剂 1范围 本标准规定了果糖二磷酸钠(FDP)含量测定用固体复合酶(ALD、TIM、GDH)试剂的技术要求、试 验方法、检验规则、标志、包装和贮存。 本标准适用于果糖二磷酸钠(FDP)含量测定用固体复合酶(ALD、TIM、GDH)试剂。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T9721化学试剂分子吸收分光光度法通则(紫外和可见光部分) GB15346化学试剂包装及标志 GB 19489 实验室生物安全通用要求 HG/T3921.化学试剂采样及验收规则 JJF1070 定量包装商品净含量计量检验规则 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 固体复合酶 每solidenzyme 果糖二磷酸钠含量测定用的复合酶试剂,含醛缩酶(ALD)、磷酸丙糖异构酶(TIM)和甘油磷酸脱 氢酶(GDH)的复合酶试剂。 3.1.2 固体复合酶活力 solid enzyme activity 3.2缩略语 下列缩略语适用于本文件。 ALD:醛缩酶 ALD、TIM、GDH:固体复合酶 DAN:氧化型辅酶I FDP:果糖二磷酸钠 GDH:甘油磷酸脱氢酶 NADH:还原辅酶I 1 GB/T32226—2015 TIM:磷酸丙糖异构酶 4技术要求 4.1组成 本固体复合酶由醛缩酶(ALD)、磷酸丙糖异构酶(TIM)、甘油磷酸脱氢酶(GDH)组成。各组分的 重量份是:ALD(醛缩酶)20%~25%,TIM(磷酸丙糖异构酶)30%~40%,GDH(甘油磷酸脱氢酶) 30%~35%。 4.2 感官要求 本品为浅红色或类白色冻干粉,溶于三羟甲基氨基甲烷溶液(0.1mol/L,pH7.6)。 4.3 3理化要求 固体酶活力不小于40μg/(min·mg)。 4.4卫生要求 符合GB19489的要求。 5试验方法 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的三级(含三级)以十 的水。 5.1外观 肉眼观察为浅红色或类白色冻干粉。 5.2固体复合酶活力的测定 SAG 5.2.1原理 本产品是以动物肌肉为主要原料生产的含ALD、TIM和GDH的复合酶试剂。FDP在NADH的 存在下,先后经ALD、TIM和GDH的作用,一分子FDP能使两分子NADH氧化成DAN,引起 NADH反应前后在34Onm处吸光度发生变化,在线性范围内,通过测定NADH在单位时间内产生的 吸光度变化值,可计算固体复合酶的活力。 5.2.2试剂和溶液 5.2.2.1盐酸三乙醇胺缓冲液(0.4mol/LpH7.6):取盐酸三乙醇胺18.6g,加水200mL溶解,加 3.7g乙二胺四乙酸二钠,溶解后,用2mol/L氢氧化钠(约18mL)调节pH至7.60,加水稀释至 后,用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH至7.6,加水稀释至250mL。过滤后4℃保 存,一周内使用。 5.2.2.2复合酶溶液:取固体复合酶0.1g加盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)溶解并稀释至10mL。重熔 漏斗过滤,4℃下保存。 5.2.2.3还原型辅酶I溶液:取还原型辅酶I6.5mg,加盐酸三乙醇胺缓冲液溶解,并稀释至50mL。 2 GB/T32226—2015 5.2.2.4果糖二磷酸钠溶液:取果糖二磷酸钠0.3g(按无水物计算),用水溶解并稀释至10mL。 5.2.3仪器和设备 紫外-可见分光光度法应符合GB/T9721的规定。 5.2.4分析步骤 取两只石英吸收皿,一只加2.99mL还原型辅酶I溶液和10L果糖二磷酸钠溶液,作为样品池; 另一只加2.99mL盐酸三乙醇胺缓冲液和10uL果糖二磷酸钠溶液,作为空白池,摇匀,静置5min,在 340nm波长处测定吸光度。向样品池中加入40μL复合酶溶液,在20℃~25℃立即摇勾并准确记 时,于1min,2min,3min,4min,5min分别测定吸光度,以时间为横坐标,吸光度为纵坐标作图,取近 似直线部分的斜率(即平均每分钟吸收度的差值△A)。重复测定2次,取平均值。 固体复合酶的活力按式(1)计算: △A 406.06 X1000 X3X 6.29X103 2 X= .(1) W 式中: X 固体复合酶的活力,单位为微克每毫克(μg/mg); AA 平均每min吸收度的差值; 3 反应溶液体积,单位为毫升(mL); 406.06 果糖二磷酸钠三钠盐的相对分子质量(C.HnNasOi2P2); 1000 毫克转化为微克,单位为微克(ug); 6.29X103 还原型辅酶I(DPNH)的摩尔吸收系数; 2 果糖二磷酸钠反应系数; W 加人样品池中的酶溶液质量,单位为毫克(mg)。 5.3净含量 按JJF1070执行。 6检验规则 6.1 组批抽样 按HG/T3921的规定进行采样。 6.2 出厂检验 6.2.1出厂检验项目包括外观、酶活力。 6.2.2产品出厂前,应由生产厂的质检部门负责按本标准规定逐批进行检验。符合标准要求,并签署 质量合格证的产品方可出厂。 6.3型式检验 6.3.1在出厂检验合格的成批产品中随机抽取Vn+1(n表示产品数量),进行型式检验 6.3.2型式检验项目为全项检验,包括外观、酶活力。但有下列情况之一时,也应进行型式检验: a)产品正常生产时,一季度进行一次; b)生产工艺、设备、原料有较大改变,可能影响产品质量时; 3
GB-T 32226-2015 果糖二磷酸钠 FDP 含量测定用固体复合酶 ALD、TIM、GDH 试剂
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