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ICS 65.150 B 51 中华人民共和国国家标准 GB/T 35896—2018 脊尾白虾 Ridge tail shrimp 2018-09-01实施 2018-02-06发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 35896—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会(SAC/TC156/SC2)归口。 本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所 本标准主要起草人:李健、刘萍、李吉涛、段亚飞。 GB/T358962018 脊尾白虾 1范围 本标准给出了脊尾白虾(EropalaemoncarinicaudaHolthuis,195o)的学名与分类,主要外部形态 特征、生长与繁殖特性、细胞遗传学特性、生化遗传学特性、分子遗传学特性、检测方法及判定规则 本标准适用于脊尾白虾的种质鉴定和检测 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分:抽样方法 GB/T19782中国对虾 SC/T1102虾类性状测定 3 学名与分类 3.1学名 脊尾白虾(EropalaemoncarinicaudaHolthuis,l95o)。 3.2分类位置 甲壳纲(Crustacea),十足目(Decapoda),长臂虾科(Palaemonidae),白虾属(Eropalaemon)。 主要外部形态特征 4. 4.1 外部特征 脊尾白虾额角侧扁细长,上下缘均具锯齿。腹部第3节至第6节背面中央有一明显的纵脊。第二 步足的腕节和指节长度约相等,但长于掌节。体色透明,微带蓝色或红色小斑点,腹部各节后缘颜色较 深。雌雄异体,雄性第二腹肢肢内缘有一细长带瓢的棒状突起,称雄性附肢,雌性具开放式纳精囊。抱 卵期间雌虾第15腹节两侧各有蓝色圆斑。尾节未端尖细,呈刺状。脊尾白虾的外部形态见图1。 1 GB/T35896—2018 a)脊尾白虾外部形态图 b)脊尾白虾尾棘外部形态图 图1 脊尾白虾形态图 4.2可数性状 额角齿式:上额角齿数/下额角齿数为6~9/3~6。 4.3可量性状 4.3.1额角基部1/3具鸡冠状隆起,额角长度约为头胸甲的1.2倍1.5倍。 4.3.2尾节两侧有2对微小的棘刺。 4.3.3第一触角上鞭分为2枝,内侧枝短,为头胸甲长的1/3。 5生长与繁殖特性 5.1生长 脊尾白虾为中型虾类,成体体长5cm~9cm,体长与体重之间的指数关系方程: W=1.026X10-5L3.08 (r=0.995) 5.2繁殖 5.2.1生物学最小型 性成熟最小个体体长4.4cm,抱卵个体最小体长4.9cm。 5.2.2繁殖期 当水温达12℃~13℃时,成熟亲虾即蜕壳、交配、产卵。雌虾在繁殖期内可以进行2次~3次产 卵,再次产卵的时间间隔为产卵后30天左右。一般2次以上产卵后自然死亡。3月~11月自然海区都 能捕到怀卵亲体。脊尾白虾养殖群体的繁殖盛期为4月~6月和8月~9月。 5.2.3卵的特性 具抱卵特性,雌虾抱卵量一般在600粒/尾~1500粒/尾之间。卵径(0.5mm~0.7mm)× (0.7mm~0.9mm),椭圆形,粘在腹部游泳足上受精卵开始为桔黄色,逐渐变为桔红色至红棕色,最后 变成灰黑色。 2 GB/T35896—2018 6 6细胞遗传学特性 染色体数目为2n=90。 生化遗传学特性 肌肉中谷氨酸脱氢酶(GDH)电泳图谱见图2。 (uh-1 图2脊尾白虾谷氨酸脱氢酶(GDH)电泳图谱 3分子遗传学特性 8 对线粒体16SrRNA基因片段进行扩增和测序,获得长度为509bp核苷酸序列,种内个体间遗传 距离小于2%,片段序列如下: 1 GGCTGTGTGGTTTATTAGTATAGAGTCTAGCCTGCCCACTGAGTTTTTAAAGGGCTGCGG 60 61 TAATTTGACCGTGCAAAGGTAGCATAATCAATAGTCTTTTAATTGAAGGCTTGAATGAAC 120 121 GGCTGGATAAAAGAGAAGCTGTCTTTTTTTCAAGTTAGAATTTGACTTTTAAGTGAAAAG 180 181 GCTTAAATTAACTAAGGGGACGATAAGACCCTATAAAACTTAATAAAAGGTTAATTTTAA 240 241 CTATGAATTGTATTTAAAAGTTGTGAAATTCTCTTTTTATTTTGTTGGGGCGACATTGAT 300 301 ATAAGCTGTAACTGTCTTGATAATAAAATAGTTATCACTATAAGCTGATCCTTTTTTAGG 360 361 GATAATAAGTATAAGTTACTTTAGGGATAACAGCGTAATTTTTTCTGAGAGTTCTTATCG 420 421 AAGAAAGTAGTTGCGACCTCGATGTTGAATTAAAATTTCATGCAGGTGTAGCCGCTTGCC 480 481 GTGTGGGTCTGTTCGACCTTTAAAATTTT 509 9 检测方法 9.1 抽样方法 按GB/T18654.2执行。 9.2 形态测量 按SC/T1102的规定执行。 9.3 繁殖特性检测 抱卵雌虾测量形态性状后,活体剥离腹部所抱受精卵,进行计数,测量30尾抱卵雌虾所抱受精卵数 量后,取平均值;受精卵卵径采取解剖镜下目微尺测量,测量30尾个体,每尾个体测量50个,取平均值, 9.4染色体的检测 按GB/T19782的规定执行。 3. GB/T35896—2018 9.5同工酶检测 9.5.1样品制备 虾活体运到实验室,肌肉放人液氮中。取出样品,加入5倍体积的0.1mol/L磷酸缓冲液(PBS)后 冰浴匀浆,4℃离心(15000r/min,10min),取上清液加入少量1%漠酚兰,再加人等体积的40%蔗糖 溶液,一20℃保存待测。 9.5.2电泳 同工酶电泳采用不连续聚内烯酰胺凝胶垂直电泳。电泳在4℃冰箱中进行。电泳参数如下: 凝胶浓度(T):T浓缩胶=3.6%(pH6.7),T分离胶=8.2%(pH8.9);电压:Tris-甘氨酸(TG,pH8.3) 系统,恒压230V;电泳时间4h。 谷氨酸脱氢酶(GDH)染色液配方如附录A所示。 9.6mtDNA16SrRNA序列分析 9.6.1DNA提取 每尾个体取约100mg腹部肌肉,剪碎组织,加人475μL组织匀浆缓冲液(10mmol/LTris-HCl, pH=8.0;50mmol/LEDTA,pH=8.0),充分混匀,依次加人终浓度为10%的SDS和20μg/mL的蛋 白酶K,55℃裂解至澄清,用酚、酚:氯仿(1:1)和氯仿各抽提1次。用DNA定量仪测定样品DNA 的浓度和纯度,1%琼脂糖凝胶电泳检测,全自动凝胶成像系统拍照,一20℃保存备用。 9.6.2线粒体16SrRNA基因片段的扩增 引物:16S AR:5'-CGCCTGTTTATCAAAAACAT-3',16S BR:5'-CCGGTCTGAACTCAGAT- CACG -3'。 PCR反应条件:94℃预变性2min,94℃变性45s,48℃退火1min,72℃延伸1min35个循环; 72℃延伸5min。PCR反应总体积体系为25μL,10×PCRbuffer2.5μL,dNTPs0.2mmol/L,MgCl 2mmol/L,Taq酶1U。引物各0.12μmol/L,模板DNA50 ng~100 ng。 PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶检测,电泳缓冲液为1XTBE(pH8.0),电压为4V/cm, Genefinder染色,于凝胶成像系统下观察并拍照记录。 9.6.3DNA序列测定 将PCR产物纯化后双向测序。 10判定规则 检测结果不符合第4章、第6章任意一条要求的,则判定为不合格项;有不合格项的样品为不合格 样品。 4 GB/T 35896—2018 附录A (规范性附录) 谷氨酸脱氢酶(GDH)染液配制方法 谷氨酸脱氢酶(GDH)染液配制方法如表A.1所示。 表 A.1 谷氨酸脱氢酶(GDH)染液配制方法 酶 英文及缩写 药品 浓度 剂量 PBS 0.5 mol/L pH 7.0 12.5mL Sodium L glutamate Glutamate 1 mol/L pH 7.0 5 mL 谷氨酸脱氢酶 dehydrogenase, NAD 5mg/mL 5 mL GDH NBT 5 mg/mL 5 mL PMS 5mg/mL 5 mL 5

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