ICS 67.140.10 X 55 中华人民共和国国家标准 GB/T 23193—2017 代替GB/T23193—2008 茶叶中茶氨酸的测定 高效液相色谱法 Determination of theanine in teaUsing high performance liquid chromatography 2018-05-01实施 2017-11-01 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 23193—2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准代替GB/T23193—2008《茶叶中茶氨酸的测定 高效液相色谱法》。与GB/T23193- 2008相比，主要技术差异如下： 测定原理及前处理过程完全不一样； 样品处理差异：0.5g样品加水100mL，80℃水浴浸提45min，修改为1.0g样品加沸水 100mL，浸提30min; 一无净化及衍生步骤，过0.45um膜后，直接进样。 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由全国茶叶标准化技术委员会（SAC/TC339）归口。 本标准起草单位：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院、国家茶叶质量监督检验中心、国家食品 质量安全监督检验中心、泉州出入境检验检疫局综合技术服务中心、福建日春实业有限公司。 本标准起草人：周卫龙、徐建峰、刘小力、陆小磊、石维妮、叶美君、刘相真、黄伙水、王启灿。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T23193—2008。 1 GB/T 23193—2017 茶叶中茶氨酸的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定茶叶中茶氨酸含量的方法。 本标准适用于茶叶中茶氨酸的测定 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T8302茶取样 GB/T 8303 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定 3原理 茶叶样品中茶氨酸经沸水加热提取、净化处理后，采用分离强极性化合物的RP-18柱，检测波长 210nm，用高效液相色谱仪进行测定，与标准系列比较定性、定量。 4试剂 4.1除非另有说明，在分析中所使用试剂均为分析纯，用水为GB/T6682规定的三级水。 4.2乙：色谱级。 4.3茶氨酸标准品（L-theanine）：纯度≥99%。 4.4HPLC流动相 4.4.1流动相A：100%纯水。 4.4.2流动相B100%乙睛（4.2）。 4.5茶氨酸标准储备溶液 4.5.1茶氨酸标准储备溶液 称取0.05g茶氨酸（精确到0.0001g），用水溶解后移人50.mL容量瓶中，稀释至刻度，混勾，此溶 液每毫升含1mg茶氨酸。有效期为一年。 4.5.2茶氨酸标准使用液 zg分别准确吸取茶氨酸标准储备溶液（4.5.1）0.0mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、 2.0mL，用水定容至10mL得到浓度分别为0.0mg/mL、0.01mg/mL、0.02mg/mL0.05mg/mL、 0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL的茶氨酸标准使用溶液。有效期为一年。 4.60.45μm水相滤膜。 5仪器 5.1高效液相色谱仪：包含梯度洗脱、紫外检测器及色谱工作站。 1 GB/T23193—2017 5.2 分析天平：感量0.0001g。 5.3 恒温水浴锅。 5.4 离心机：转速13000r/min。 6 测定步骤 6.1 样品处理 6.1.1 取样 按GB/T8302的规定。 6.1.2 试样制备 按GB/T8303的规定 6.1.3干物质含量测定 按GB/T8303的规定。 6.1.4样品制备 茶叶样品经磨碎混匀后，称取1.0g（准确至0.01g）磨碎试样（或茶叶）于200mL烧杯中，加沸蒸馏 水100mL。置于100℃的恒温水浴锅（5.3)中浸提30min，过滤，转移到100mL容量瓶中，冷却后，用 水定容至刻度，混匀。用0.45μm水相滤膜（4.6）过滤，或者取1mL样品，在13000r/min条件下高速 离心10min，然后进液相色谱分析。 6.2 测定 6.2.1 色谱条件 色谱条件如下： 色谱柱:RP-18 (粒径5 μm,250 mmX4.6 mm); 流速:0.5mL/min~1.0mL/min; 柱温：35℃±0.5℃； 进样量：10μL~20μL； 检测波长：210nm； 梯度洗脱条件：如表1所示。 表 1 梯度洗脱条件 时间/min A/% B/ % 备注 0 100 0 分析 10 100 0 分析 12 20 80 洗柱 20 20 80 洗柱 22 100 0 平衡 40 100 0 平衡 注：A：100%纯化水；B:100%乙腈 2