书 书 书/G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ５００９ ． ２５０ — ２０１６ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G21 /G22 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 ２０１６  ０８  ３１ /G32 /G33 ２０１７  ０３  ０１ /G34 /G35 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G2B /G2C /G26 /G2D /G2E /G2C /G2F /G30 /G31 /G32 /G32 /G33书 书 书犌犅 ５００９ ． ２５０ — ２０１６ Ⅰ 　　　　前 　　 言 　　 本标准代替 ＧＢ ／ Ｔ２１９１７ — ２００８ 《 饮料中乙基麦芽酚的测定方法 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ２１９１７ — ２００８ 相比 ， 主要变化如下 ： ——— 标准名称修改为 “ 食品安全国家标准 　 食品中乙基麦芽酚的测定 ”； ——— 增加了标准的适用范围 ； ——— 增加了不同类型食品试样的前处理方法 ； ——— 修改了液相色谱条件 ； ——— 增加了附录 Ｂ 质谱确证 。犌犅 ５００９ ． ２５０ — ２０１６ １ 　　　　食品安全国家标准 食品中乙基麦芽酚的测定 １ 　 范围 本标准规定了食品中乙基麦芽酚含量的高效液相色谱测定方法 。 本标准适用于饮料 、 糖果 、 果冻 、 肉制品 、 饼干 、 面包 、 糕点 、 乳粉食品中乙基麦芽酚含量的测定 。 ２ 　 原理 试样经提取 、 净化后 ， 采用配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色谱仪检测 ， 外标法定量 ； 阳性样品需要采用质谱法进行定性确认 。 ３ 　 试剂和材料 除非另有说明 ， 本方法所用试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的二级水 。 ３ ． １ 　 试剂 ３ ． １ ． １ 　 甲醇 （ ＣＨ ３ ＯＨ ）： 色谱纯 。 ３ ． １ ． ２ 　 乙腈 （ ＣＨ ３ ＣＮ ）： 色谱纯 。 ３ ． １ ． ３ 　 磷酸二氢钠 （ ＮａＨ ２ ＰＯ ４ · ２Ｈ ２ Ｏ ）。 ３ ． ２ 　 磷酸二氢钠溶液配制 称取 ３．９０ｇ 磷酸二氢钠 ， 加水溶解并稀释至近 １０００ｍＬ ， 经磷酸调节 ｐＨ 至 ４．０±０．１ ， 定容至 １０００ｍＬ ， 经微孔滤膜过滤备用 。 ３ ． ３ 　 乙基麦芽酚 （ Ｃ ７ Ｈ ８ Ｏ ３ ） 标准品 纯度不小于 ９９％ 。 ３ ． ４ 　 标准溶液配制 ３ ． ４ ． １ 　 标准储备液 ： 称取乙基麦芽酚 ０．１ｇ （ 精确至 ０．０００１ｇ ）， 用甲醇溶解 ， 并定容至 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 此溶液浓度为 １ｍｇ ／ ｍＬ 。 ３ ． ４ ． ２ 　 标准系列工作液 ： 分别准确吸取不同体积的标准储备液 ， 用甲醇将其稀释成乙基麦芽酚含量分别为 ０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ０．５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ２．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ２５．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １００．０ μ ｇ ／ ｍＬ 的标准系列工作液 。 ４ 　 仪器和设备 ４ ． １ 　 高效液相色谱仪 （ ＨＰＬＣ ）： 配有二极管阵列检测器 （ ＤＡＤ ） 或紫外检测器 （ ＵＶＤ ）。 ４ ． ２ 　 超声波清洗器 。犌犅 ５００９ ． ２５０ — ２０１６ ２ 　　　　 ４ ． ３ 　 涡旋混合仪 。 ４ ． ４ 　 水浴锅 。 ４ ． ５ 　 离心机 ： 转速不低于 ６０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ４ ． ６ 　 分析天平 ： 感量分别为 ０．０１ｇ 、 ０．００１ｇ 和 ０．０００１ｇ 。 ５ 　 分析步骤 ５ ． １ 　 试样制备 ５ ． １ ． １ 　 碳酸饮料 、 果汁饮料 、 乳饮料 、 植物蛋白饮料试样 准确称取 １０ｇ 试样 （ 精确至 ０．０１ｇ ）（ 碳酸饮料需先超声 ２ｍｉｎ ～ ３ｍｉｎ 以除去二氧化碳后取样 ） 于 ２５ｍＬ 具塞刻度试管中 ， 用乙腈定容至刻度 ， 混匀 ， 超声 １０ｍｉｎ （ 若样品溶液浑浊时 ， ６０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ）， 取上清液 ， 经微孔滤膜过滤 ， 滤液进液相色谱仪分析 。 ５ ． １ ． ２ 　 糖果 、 果冻试样 准确称取 ２ｇ 试样 （ 精确至 ０．００１ｇ ） 于 ２５ｍＬ 具塞刻度试管中 ， 加入 ２０ｍＬ 水 ， 置于 ６０℃ ～ ７０℃ 水浴锅中加热 ２ｍｉｎ ～ ３ｍｉｎ ， 加塞 ， 剧烈振摇使其分散均匀 ， 再置于 ６０℃ ～ ７０℃ 水浴锅中加热 ３０ｍｉｎ ， 取出后趁热超声 ５ｍｉｎ ， 冷却后用甲醇定容至刻度 （ 奶糖用乙腈定容 ）， ６０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ， 取上清液 ， 经微孔滤膜过滤 ， 滤液进液相色谱仪分析 。 ５ ． １ ． ３ 　 肉制品 、 饼干 、 面包 、 糕点试样 准确称取 ２ｇ 粉碎均匀试样 （ 精确至 ０．００１ｇ ） 至 ２５ｍＬ 具塞刻度试管中 ， 加入 ５ｍＬ 水 ， 加塞 ， 涡旋 １ｍｉｎ ， 使其分散均匀后 ， 再加 １５ｍＬ 甲醇 ， 加塞 ， 摇匀 ， 超声 ２０ｍｉｎ ， 用甲醇定容至刻度 ， ６０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ， 取上清液 ， 微孔滤膜过滤 ， 滤液进液相色谱仪分析 。 ５ ． １ ． ４ 　 乳粉试样 准确称取 ２ｇ 试样 （ 精确至 ０．００１ｇ ） 至 ２５ｍＬ 具塞刻度试管中 ， 加入 ８ｍＬ 水 ， 加塞 ， 涡旋 １ｍｉｎ ， 使其充分溶解后 ， 加 １５ｍＬ 乙腈 ， 加塞 ， 摇匀 ， 超声 ２０ｍｉｎ ， 用乙腈定容至刻度 ， ６０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ， 取上清液 ， 经微孔滤膜过滤 ， 滤液进液相色谱仪分析 。 ５ ． ２ 　 仪器参考条件 ５ ． ２ ． １ 　 色谱柱 ： Ｃ １８ 柱 ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ ， ５ μ ｍ ， 或性能相当者 。 ５ ． ２ ． ２ 　 流动相 ： Ａ 为甲醇 ； Ｂ 为磷酸二氢钠溶液 ， 梯度洗脱条件见表 １ 。 表 １ 　 方法的梯度洗脱条件 时间 ｍｉｎＡ ％Ｂ ％ ０ ２５ ７５ １６ ２５ ７５ １６．１ １００ ０ ２０ １００ ０