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ICS 07.080 A 40 中华人民共和国国家标准 GB/T 37870—2019 个体鉴定的高通量测序方法 Individual identification by high-throughput sequencing method 2019-08-30实施 2019-08-30发布 国家市场监督管理总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 37870—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家标准物质研究中心提出并归口。 本标准起草单位:深圳华大生命科学研究院(原深圳华大基因研究院)、中国计量科学研究院、深圳 华大智造科技有限公司、深圳华大基因科技有限公司、深圳基因产学研资联盟。 本标准主要起草人:谢一帆、王晶、谢伟伟、陈芳、蒋慧、杜佳婷、牛春艳、李陶莎、刘心、程奇、李倩一、 李岱怡、谢强 1 GB/T37870—2019 引言 个体鉴定在恐怖事件、重大灾害、交通事故的急救医学和侦查破案中有较大的适用性。本标准是结 合核酸生物技术和高通量测序技术以检测人体样本的STR位点和SNP位点进行个体鉴定,对于维护 社会稳定有极其重要的意义。 Ⅱ GB/T378702019 个体鉴定的高通量测序方法 1范围 本标准规定了个体鉴定高通量测序方法的术语和定义、原理、试验条件、仪器与设备、试剂、试验步 骤和结果分析 本标准适用于人体的血液及血痕、毛发、唾液斑等样本的个体鉴定。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T29859—2013生物信息学术语 GB/T30989—2014高通量基因测序技术规程 3术语和定义 GB/T29859—2013及GB/T30989一2014界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于 使用,以下重复列出了GB/T29859—2013及GB/T30989—2014中的某些术语和定义。 3.1 测序 sequencing 测定氨基酸或核苷酸序列的过程。 [GB/T29859—2013,定义2.4.13 3.2 高通量基因测序high-throughputgene sequencing 区别于传统Sanger(双脱氧法)测序,能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术,通 常一次测序反应能产出不低于100Mb的测序数据。 [GB/T30989—2014,定义3.19] 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleotidetriphosphate) PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) SNP:单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphisms) STR:短串联重复序列(ShortTandemRepeat) 5原理 采集样本后,结合核酸生物技术和高通量测序技术,检测特异的分子遗传标记位点(STR位点和 1 GB/T37870—2019 若测试样本与待检者的分子遗传标记位点分型均相同,则判断为匹配。 若测试样本与待检者有两个及以上位点分型结果不同,在排除等位基因丢失等前提下,判断为不 匹配。 若测试样本与待检者只有一个位点分型结果不同,不能排除测试样本来源于待检者,需要增加更多 特异的分子遗传标记位点进行检测。增加检测更多位点后,测试样本与待检者有两个及以上位点分型 结果不同,判断为不匹配。 测试样本与待检者匹配的原因有两种:一是测试样本可能来源于待检者;二是测试样本可能来源于 人群中的随机个体,仅仅是分子遗传标记位点分型碰巧相同。因此,需要通过计算匹配概率和似然率来 进行个体鉴定。 匹配概率是人群中的随机个体纯粹由于机会与待检者分型结果一致的概率,以此估计一个理论上 的随机个体碰巧匹配的可能性。似然率在数值上等于样本来源于待检者的概率与样本来源于随机个体 的概率比值。 6试验条件 实验室应做到防正污染,根据功能划分为试剂储存和准备区、样本制备区、扩增区、扩增产物分析区 和其他区域。实验室人员应具备良好的分子生物学专业技术操作能力。 7仪器与设备 7.1PCR仪:温度设置范围为0℃~99℃,最大循环数为99。 SAC 7.2高通量测序仪:测序通量≥100Mb,碱基识别质量>20,碱基识别正确率≥99.9%。 7.3离心机:实验室通用高速离心机,最高转速不低于16000r/min。 7.4涡旋振荡仪 7.5冰箱:温度调节范围为一20℃~4℃。 8试剂 8.1试验用水 级水,电导率(25℃)≤0.01mS/m,吸光度(254nm,1cm光程)≤0.001,可溶性硅(以Si0O2计) 含量≤0.01mg/L。 8.2DNA提取试剂 8.2.1Chelex-100试剂 Chelex-100、TNE缓冲液、蛋白酶K、十二烷基硫酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)。 注:Chelex为聚苯乙烯二乙烯基苯树脂。 8.2.2试剂盒 基因组DNA提取试剂盒。 8.3PCR扩增试剂 个体鉴定的引物混合液及PCR反应的预混体系。PCR反应的预混体系包括DNA聚合酶、PCR 2
GB-T 37870-2019 个体鉴定的高通量测序方法
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