ICS 07.080 A 21 中华人民共和国国家标准 GB/T34224—2017 生物产品中功能性微生物检测 Method for determination of functional microorganism in biologic products 2018-04-01实施 2017-09-07发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T34224—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：河北省食品检验研究院、浙江工商大学、中国水产科学研究院黄海水产研究所、中 国标准化研究院、浙江李子园食品股份有限公司、河北医科大学、北京食品科学研究院、合肥工业大学、 河南大学、江南大学、河北省出入境检验检疫局、石家庄君乐宝乳业有限公司、荣成市华通海洋生物科技 有限公司。 本标准主要起草人：张岩、王彦波、傅玲琳、赵峰、马爱进、王丽霞、王顺余、吕品、周巍、孙勇、郑磊、 康文艺、周鹏、刘道亮、柴艳兵、张耀广、部晓峰、刘忠甫、李永波。 GB/T 34224—2017 生物产品中功能性微生物检测 1范围 本标准适用于生物产品中植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、地衣芽孢杆菌检测（Bacilluslicheniformis）粪肠球 菌（Enterococcusfaecalis）、屎肠球菌（Enterococcusfaecium）、产假丝酵母（Candidautilis）和酿酒酵 母（Saccharomycescerevisiae）的检验。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则 GB 4789.28 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB/T27405 实验室质量控制规范食品微生物检测 RB/T151食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南 SN/T0330 出口食品微生物学检验通则 SN/T 2632 微生物菌种常规保藏技术规程 SN/T 2660 食品微生物实验室菌种保藏方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 生物产品biologicproducts 与生物有关的工业产品。 注：本标准中的生物产品特指功能性微生物经过工业化生产扩繁后加工制成的活菌制剂及添加了该类制剂的 产品。 3.2 功能性微生物functionalmicroorganism 一定条件下，具有确切调节改良功能的活的微生物菌株 3.3 菌落形成单位 colony-formingunits;CFU 1 GB/T34224—2017 4总则 4.1 1按照本标准执行的功能性微生物检验应符合SN/T0330的规定。 4.2 实验室生物安全要求应符合GB19489的规定。 4.3 3实验室人员应满足GB4789.1的规定。 4.4菌株保存应符合SN/T2632和SN/T2660的规定。 4.5 5培养基和试剂的质量要求应符合GB4789.28的规定 4.6 实验室质量控制应符合GB/T27405的规定 4.7定量检测数值修约按四舍五人”原则进行，报告单位为CFU/g/（CFU/mL）。定量检测的测量不 确定度评估按照RB/T151的要求执行。 4.8 3检验结果报告后，被检样品方能处理。样品要经过无害化处理。 5 植物乳杆菌 5.1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。 5.1.1 恒温厌氧培养箱：37℃土1℃。 5.1.2 冰箱：2℃~5℃。 5.1.3 天平：感量为0.1g。 5.1.4 均质器及无菌均质袋、均质杯。 5.1.5 振荡器。 5.1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 5.1.7 无菌锥形瓶：容量250mL500mL。 5.1.8 无菌培养皿：直径90mm。 5.1.9 显微镜：10倍~100倍。 5.1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 5.2 培养基和试剂 5.2.1 MRS(ManRogosaSharpe)琼脂培养基：见附录A中A.1。 5.2.2 MRS肉汤培养基：见A.2。 5.2.3无菌生理盐水：见A.10。 5.2.4革兰氏染色液：见A.11。 5.2.5 细菌生化鉴定试剂盒。 5.3 检验程序 植物乳杆菌检验程序见图1。 2 GB/T 34224—2017 样品25g（imL)+225mL无菌生理盐水 10倍系列稀释 + 选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释 度吸取样品勾液0.1mL.接种了MRS琼胎 厌氧培养，37℃±1℃,48 h±2 h 茵落计数 挑选平板上5个边缘透明、整齐的菌落分别 转入MRS肉汤培养基 灰氧培养，37 ℃±1℃,24 h±2 h 形态学鉴定 生化鉴定 报否 图1植物乳杆菌检验程序 5.4操作步骤 5.4.1样品制备 5.4.1.1固体和半固体样品 称取25g样品，置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成 质1min~2min制成1：10的样品匀液。 5.4.1.2液体样品 应先将其充分摇匀后，以无菌吸管吸取样品25mL放人装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内 预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1：10的样品匀液。 5.4.2样品稀释 5.4.2.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理 盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合 均匀，制成1：100的样品匀液。 5.4.2.2另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释 一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。 5.4.3培养 3