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ICS 67.080 X 74 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 21916—2008 水果罐头中合成着色剂的测定 高效液相色谱法 Determination of synthetic colour in fruit tins- High performance liquid chromatography 2008-05-16发布 2008-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21916—2008 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由全国食品安全应急标准化工作组提出并归口。 本标准主要起草人:于立强、王冬妍、苏锡辉、赵丽秀、吕成学、张凤清、赵检、张丽君、黄士军、 明立艳、杨晓丽。 GB/T21916—2008 水果罐头中合成着色剂的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了水果罐头中柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红人工合成着 色剂的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水果罐头中柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红人工合成着 色剂的测定。 本标准检出限为柠檬黄0.300mg/kg、苋菜红0.300mg/kg、靛蓝0.300mg/kg、胭脂红0.300mg/kg、 日落黄0.150mg/kg、诱惑红0.150mg/kg、亮蓝0.100mg/kg、赤藓红0.150mg/kg。 2原理 水果罐头中的人工合成着色剂用乙醇-氨水提取,利用固相萃取柱净化,采用高效液相色谱-二极管 阵列检测器测定,外标法定量。 3试剂和材料 3.1水:去离子水或相当纯度的水。 3.2甲醇:色谱纯。 3.3无水乙醇:分析纯。 3.4氨水:分析纯。 3.5盐酸:分析纯。 3.6乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵,加水溶解,定容至1000mL,经0.45μm过滤器 过滤。 3.7无水乙醇-氨水溶液:量取无水乙醇80mL,氨水1mL,加水定容至100mL,混匀。 3.8pH8的50%甲醇溶液:量取甲醇50mL,加水定容至100mL,混匀,加氨水调pH值到8。 3.9pH8的水:水加氨水调pH值到8。 3.102%氨水:量取氨水2mL,加水定容至100mL,混匀。 3.11盐酸-乙醇溶液(1+9):量取10mL盐酸、90mL乙醇,混勺。 3.1250%甲醇溶液:量取甲醇50mL,加水定容至100mL,混匀。 3.13固相萃取柱或相当者:Sep-PakPlusQMA360mg,颗粒度37μm~55μm,临用前依次加5mL 甲醇(3.2)和5mL水预处理,保持柱体湿润。 3.14合成着色剂标准储备液:准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、 日落黄、诱感红、亮蓝、赤藓红各0.0500g,置100mL容量瓶中,加水至刻度,配制成500ug/mL标准 储备液。 4仪器 4.1高效液相色谱仪,配有二极管阵列检测器。 1 GB/T 21916—2008 4.2 分析天平:感量0.1mg。 4. 3 匀浆机。 4. 4 快速混匀器。 4. 5 离心机:3000r/min。 4. 6 恒温水浴。 4.7 0.45μm水性样品过滤器。 4.8 固相萃取装置。 5样品制备 5.1提取 将整份试样用匀浆机打碎,再搅拌均匀,准确称取2.00g左右样品(精确至0.01g),装人离心管 中。加10mL无水乙醇-氨水溶液,涡旋0.5min,再3000r/min离心10min,将上清液倒人塞有脱脂 棉的玻璃漏斗中过滤,将剩余残渣再重复操作三次,将收集的滤液(约40mL)置于80℃水浴中浓缩至 约2mL,为试样溶液。 5.2净化 将浓缩后的试样溶液用2%的氨水调成pH8后,转移到预处理过的固相萃取柱中,依次用3mL pH8的水和3mLpH8的50%甲醇以小于2mL/min的流速清洗,弃去全部流出液。再用10mL盐酸 乙醇溶液(1十9)将着色剂洗脱出固相萃取柱,收集洗脱液,用氨水中和,80℃水浴浓缩至尽干,冷却后用 50%的甲醇溶液溶解并定容至10mL,经0.45μm滤膜过滤后,进行高效液相色谱测定。 6测定 6.1液相色谱条件 6.1.1色谱柱:DiamonsilCis,5μm,4.6mmX250mm。 6.1.2流动相:甲醇-乙酸铵溶液(0.02mol/L)。 6. 1. 3 梯度洗脱:梯度洗脱条件见表1。 表1# 液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 流速/(mL/min) 甲醇/% 乙酸铵溶液/% 1. 0 20 80 5 1. 0 35 65 10 1. 0 80 20 16 1. 0 80 20 17 1. 0 20 80 25 1. 0 20 80 6.1.4进样量:10L。 6.1.5检测器:二极管阵列检测器选择柠檬黄428nm、苋菜红521nm、靛蓝608nm、脂红509nm、 日落黄483nm、诱惑红507nm、亮蓝625nm、赤藓红529nm波长测定 6.2测定 根据保留时间定性,外标峰面积法定量。 八种合成着色剂标准品的液相色谱图参见附录A。 2 GB/T21916—2008 结果计算 7 结果按式(1)计算: ..... 1) mX1000 式中: X一一试样中被测组分的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); c——由标准曲线得到的试样溶液中被测组分的含量,单位为微克每毫升(μug/mL); 一试样溶液定容体积,单位为毫升(mL); m—试样质量,单位为克(g)。 计算结果保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
GB-T 21916-2008 水果罐头中合成着色剂的测定 高效液相色谱法
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