ICS 59. 080. 01 W04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 20944.1—2007 纺织品 抗菌性能的评价 第1部分：琼脂平血扩散法 Textiles-Evaluation for antibacterial activity- Part 1:Agar diffusion plate method 2007-06-14发布 2008-01-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 20944.1—2007 前言 GB/20944《纺织品抗菌性能的评价》包括如下3个部分： 第1部分：琼脂平皿扩散法； 一第2部分：吸收法； 第3部分：振荡法。 本部分为GB/T20944的第1部分 本部分参考了国际标准ISO20645：2004《纺织织物——抗菌活性的测定——琼脂平皿扩散试验》。 本部分由中国纺织工业协会提出。 本部分由全国纺织品标准化技术委员会基础分会（SAC/TC209/SC1）归口 本部分由国家棉纺织产品质量监督检验中心、北京洁尔爽高科技有限公司、深圳市康益保健用品有 限公司，江苏AB集团有限责任公司、纺织工业标准化研究所负责起草。 本部分主要起草人：徐路、商成杰、张华、裴茹冰。 GB/T20944.1—2007 纺织品抗菌性能的评价 第1部分：琼脂平血扩散法 1范围 GB/T20944的本部分规定了采用琼脂平血扩散法测定纺织品抗菌性能的定性试验和评价方法。 本部分适用于机织物、针织物、非织造织物和其他平面织物。纤维、纱线等可参照执行。 本部分不适用于抗菌剂在试验琼脂上完全不扩散的试样，也不适用于抗菌剂与琼脂起反应的试样。 本部分不涉及抗菌产品安全性的评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于GB/T20944的本部分。 2. 1 抗菌性能 antibacterial activity 产品所具有的抑制细菌繁殖的性能 2. 2 抑菌带zoneof bacterial inhibition 琼脂培养基表面与试样接触的边界处无细菌繁殖的区域，即试样边缘附近没有细菌的环带。 3安全预防措施 本方法需要使用细菌，并且具有促进细菌繁殖的条件，所以应在规定的试验环境下由经过培训的人 员进行试验。 4原理 平血内注入两层琼脂培养基，下层为无菌培养基，上层为接种培养基。试样放在两层培养基上，培 养一定时间后，根据培养基和试样接触处细菌繁殖的程度，定性评定试样的抗菌性能。 5设备、培养基和试剂 5.1设备 5.1.1分光光度计，检测波长660nm。 5.1.2恒温培养箱：温度能保持在37℃土2℃。 5.1.3水浴锅：温度能保持在45℃土2℃。 5.1.41 恒温调速摇瓶柜。 5.1.5冰箱：温度能保持在2℃~8℃。 5.1.6高压灭菌锅：温度能保持在121℃，压力能保持在103kPa。 5.1.7 显微镜：放大倍数20倍，下光源照明。 5.1.8 平皿：玻璃或聚苯乙烯制，直径90mm~100mm或55mm~60mm。 微量移液器，最小刻度5uL。 5. 1.9 5.1.10 二级生物安全柜。 5. 1. 11 试管、烧瓶等实验室常用器具。 1 GB/T20944.12007 5.2培养基和试剂 5.2.1试剂 试验所用试剂应是分析纯的或适用于微生物试验用的。试验用水应是用于制备微生物培养基的分 析级的纯水，可用蒸馏、离子交换或用反渗装置过滤等方法制取，应无毒和无抑菌物质。 5.2.2培养基 营养肉汤和琼脂培养基采用下列组分，如有偏离应在试验报告中说明 a）营养肉汤 胰蛋白陈 15 g 植物蛋白陈 5 g 氯化钠 5 g 蒸馏水 （最终定容至）1000mL 灭菌后，pH值为7.2±0.2。 b）琼脂培养基 胰蛋白陈 15 g 5 g 植物蛋白陈 氯化钠 5 g 琼脂粉 15 g 蒸馏水 （最终定容至）1000mL 灭菌后pH值为7.2±0.2。 注1：建议使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。 注2：营养肉汤和琼脂培养基配制后如不立即使用，5℃~10℃保存。配制超过一个月后不可使用。 6试验细菌 应使用下列革兰氏阳性和其中一种革兰氏阴性菌种。 金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus（ATCC6538）革兰氏阳性； 肺炎克雷伯氏菌Klebsiellapneumoniae（ATCC4352）革兰氏阴性； 一大肠杆菌Escherichiacoli（8099或ATCC11229）革兰氏阴性。 注1：可使用加人世界菌种保藏联合会（WFCC)的菌种保藏机构提供的、与上述菌种等效的试验细菌， 注2：根据需要，可采用其他的试验菌种，培养基成分、培养温度和培养方法可根据需要调整。 7试验菌液的制备 7.1冻干菌的活化 将冻干菌融化分散在5mL的营养肉汤中成悬浮状，在37℃土2℃下培养18h～24h。 用接种环取菌悬液以划线法接种到琼脂培养基平皿上，在37℃土2℃下培养18h～24h 从培养皿上取典型菌落接种在琼脂培养基斜面试管内，在37℃土2℃下培养18h～24h。 将斜面试管贮存于冰箱内（5℃～10℃），作为保存菌，保存期不超过一个月，每月传代一次，传代次 数不超过10代 7.2试验菌液的制备 7.2.1用接种环取保存菌，以划线法接种到琼脂培养基平皿上，37℃土2℃下培养24h。 注：该平血在5℃10℃条件下保存，在1周内使用 7.2.2取营养肉汤20mL放入100mL的三角烧瓶内，用接种环取7.2.1平皿上的典型菌落接种在肉 汤内培养。培养条件为：温度37℃土2℃，振动频率110min-l，时间18h~24h。 7.2.3用蒸馏水20倍稀释营养肉汤，用其调节培养后的菌浓度为1×10°CFU/mL~5×10°CFU/mL，作 2 GB/T 20944.1—2007 为试验菌液。采用分光光度计或适当的方法测定菌液浓度。 注：该试验菌液冰冷保存（3℃~4℃),在4h内使用。 8试样的准备 8.1试样 从样品上选取有代表性的试样，每种菌试验4块（正面2块，反面2块）圆形试样，直径为25mm士 5mm。试样不应进行灭菌。 注1：短纤维、长绒毛织物可剪碎，在培养基上形成一厚层。为便于操作，可将一玻璃环先放在琼脂培养基上，填充 试验材料后，再拿开。 注2：由于涂层织物不透气，可能会抑制细菌的生长。这种情况下，可将试样剪成小条，排放在培养基上，每条之间 留有小空隙。 8.2对照样 取1块与试样材质相同但未经抗菌整理的材料作为对照样，尺寸与试样相同。如果没有，则取不经 任何处理的100%棉织物。 9步骤 9.1准备下层无菌培养基。向无菌平皿中倾注10mL琼脂培养基，并使其凝结。 9.2准备上层接种培养基。取45℃土2℃的琼脂培养基150mL放入烧瓶，加入1mL试验菌液。振 荡烧瓶使细菌分布均匀，向9.1中的每个平皿中倾注5mL，并使其凝结。接种过的琼脂培养皿应在1h 内使用。 养基之间很好地接触。 9.4将试样放在琼脂培养基上后，立即放入37℃士2℃的培养箱中培养18h～24h，要确保在整个培 养期中试样和琼脂培养基保持接触。 10 结果的计算和评价 10.1每个试样至少测量3处，并按式（1）计算试样的抑菌带宽度。 H =(D-d)/2 (1) 式中： H—一抑菌带宽度，单位为毫米（mm）； D一一抑菌带外径的平均值，单位为毫米（mm）； d一—试样直径，单位为毫米（mm）。 10.2测定抑菌带后，用镊子将试样从琼脂培养基上移去，用显微镜检查试样下面接触区域的细菌繁殖 情况。 表1抗菌效果评价 试样下面的 抑菌带宽度/mm 描述 评 价 细菌繁殖情况 >1 无 抑菌带大于1mm，没有繁殖 0~1 无 抑菌带在1mm之内，没有繁殖 效果好 0 无 没有抑菌带，没有繁殖 0 轻微 没有抑菌带，仅有少量菌落，繁殖几乎被抑制 效果较好