ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T 8381.7—2009 代替GB/T8381.7—2005 饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法 Determination of olaquindox in feed- High performance liquid chromatography 2009-09-01实施 2009-05-12发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 8381.7—2009 前言 本标准代替GB/T8381.7—2005《饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法》。 本标准与GB/T8381.7—2005相比主要变化如下： 在试样提取过程中增加了固相萃取净化方法，流动相不再做pH调整 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)提出并归口。 本标准负责起草单位：农业部饲料工业中心、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）、 中国农业大学 本标准主要起草人：杨文军、张丽英、王宗义、贺平丽。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -GB/T 8381.7—2005。 GB/T 8381.7—2009 饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了以高效液相色谱测定饲料中喹乙醇的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中乙醇的测定，最低定量限为1mg/kg， 检出限为0.1mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一2008，ISO3696：1987，MOD） 3原理5G 试样中的喹乙醇以甲醇溶液提取，固相萃取小柱净化，反相液相色谱柱分离测定，紫外检测器检测， 外标法定量分析。 4试剂和溶液 4 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的三级用水。 警告一一喹乙醇对光敏感，应避光操作及使用棕色容器。 4.1甲醇（色谱纯）。 4.2提取液：甲醇十水=5十95。 4.3高效液相色谱流动相：甲醇和超纯水（采用二元梯度）。 4.4淋洗液1：0.02mol/L盐酸。移取1.67mL盐酸定容至1000mL。 4.5淋洗液2：0.1mol/L盐酸。移取8.33mL盐酸定容至1000mL。 4.6淋洗液3：甲醇十水=5十95。 4.7洗脱液：甲醇十水=40+60。 4.8喹乙醇标准储备液：准确称取喹乙醇标准品0.05020g（含量≥99.6%），于50mL棕色容量瓶中， 超声溶解，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，使其溶液浓度为1mg/mL，储存于一18℃冰箱中，可使用一 个月。 4.9喹乙醇标准工作液：准确量取标准储备液（4.8）于容量瓶中，用洗脱液（4.7）稀释，依次配制成浓度 为0.1μg/mL、1.0μg/mL.5.0μg/mL,10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL.100.0μg/mL的标准 溶液，现配现用。 5仪器 5.1离心机:3500r/min。 5.2摇床：转速可达110r/min。 5.3螺口离心管：50mL。 1 GB/T 8381.7—2009 5.4超声波清洗器。 5.5微孔有机相滤膜：孔径0.22μm。 5.6固相萃取小柱（SPE)：OasisHLB1mL(30mg）或性能相当者。 5.7固相萃取仪。 5.8恒温振荡器。 6 试样制备 选取有代表性饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过0.42mm孔径筛，混匀，装 入密闭容器中，避光低温保存，备用。 分析步骤 7.1试液的制备 7.1.1提取 下恒温振荡器振荡速度110r/min，避光振荡45min。提取液在3500r/min下离心10min，上清液经 滤纸过滤，滤液作为SPE小柱净化使用。 7.1.2净化 SPE小柱的活化：临用前分别向SPE小柱中加人2mL甲醇（4.1)和2mL超纯水，对小柱进行活 化。将滤液（7.1.1)2mL加人活化好的SPE小柱，分别用2mL淋洗液1（4.4）、淋洗液2（4.5）和淋洗 液3（4.6）淋洗小柱，并将小柱吹干。最后用2mL洗脱液（4.7)洗脱。 7.1.3上机 洗脱液过0.22μm有机相滤膜，滤液上机测定。 7.2色谱条件 7.2. 1 色谱柱：具有Cl.填料的柱子（粒度为5μm），柱长250mm，内径4.6mm。 7. 2. 2 流动相及洗脱程序：如表1。 表1林 梯度洗脱程序 时间/min 超纯水/% 甲醇/% 0 85 15 5 85 15 10 30 70 14 30 70 18 85 15 25 85 15 7.2.3流速：1.00mL/min。 7.2.4进样体积：10μL~20μL。 7.2.5检测器：紫外检测器，检测波长260nm。 8定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向液相色谱柱中注入待测定喹乙醇标准工作液及试 样溶液（7.1.3），得到色谱峰面积响应值，用外标法定量 2 SAC GB/T 8381.7—2009 9结果计算 9.1试样中乙醇的质量分数w;(mg/kg）按式（1)计算： P, XVXc, XVst w= ..(1) Pst XmXVi 式中: 试样溶液峰面积值； V 样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）； 标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； Vst 标准溶液进样体积，单位为微升（μL)； Pst 标准溶液峰面积平均值； m 试样质量，单位为克（g）； V 试样溶液进样体积，单位为微升（μL）。 9.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。 10 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。 GB/T8381.7一2009《饲料中喹乙醇的测定 高效液相色谱法》 国家标准第1号修改单 本修改单经国家标准化管理委员会于2019年6月4日批准，自2019年6月4日起实施 一、将5.6中固相萃取小柱（SPE)：OasisHLB1mL(30mg)或性能相当者”修改为"固相萃取小 柱（SPE）：OasisHLB3mL（60mg）或性能相当者” 二、将7.1.2净化中SPE小柱的活化修改为“临用前分别向SPE小柱中加入3mL甲醇（4.1)和 3mL超纯水。将滤液（7.1.1)2mL加人活化好的SPE小柱，分别用3mL淋洗液1（4.4）、淋洗液2 （4.5)和淋洗液3（4.6)淋洗小柱，并将小柱吹干。最后用2mL洗脱液（4.7)洗脱。”