ICS 67.040 C 53 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T5009.183—2003 部分代替GB16322—1996 植物蛋白饮料中酶的定性测定 Qualitative analysis of urease in vegetable protein drinking 2004-01-01实施 2003-08-11发布 中华人民共和国卫生部 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 5009.183—2003 前言 本标准代替GB16322一1996《植物蛋白饮料卫生标准》中附录A"脲酶定性测定方法” 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 责起草。 本标准主要起草人：王旭太、徐继康、杨玉芝、徐留发、陆守政 GB/T 5009.183—2003 植物蛋白饮料中脲酶的定性测定 1范围 本标准规定了植物蛋白饮料中脲酶的定性测定方法。 本标准适用于植物蛋白饮料中脲酶的定性测定。 2原理 脲酶在适当的pH和温度下催化尿素，转化成碳酸铵，碳酸铵在碱性条件下形成氢氧化铵，再与纳 氏试剂中的碘化钾汞复盐作用形成碘化双汞铵，如试样中脲酶活性消失，上述反应即不发生。 (NH)CO, +2NaOH→Na2CO; +NH,OH 2K,[HgI,J+3KOH+NH→NH,Hg2OI+7KI+2H,O （黄棕色沉淀） 3试剂 3.11%尿素溶液。 3.210%钨酸钠溶液 3.32%酒石酸钾钠溶液。 3.45%硫酸。 3.5中性缓冲液：取0.067mol/L磷酸氢二钠溶液611mL，加人389mL0.067mol/L磷酸二氢钾溶 液混合均匀即可。 3.5.10.067mol/L磷酸氢二钠溶液：称取无水磷酸氢二钠9.47g溶解于1000mL水中。 3.5.20.067mol/L磷酸二氢钾溶液：称取磷酸二氢钾9.07g溶于1000mL水中即成 3.6纳氏试剂：称取红色碘化汞（Hgl,）55g，碘化钾41.25g溶于250mL水中，溶解后，倒入1000mL 容量瓶中。再称取氢氧化钠144g，溶于500mL水中，溶解并冷却后，再缓慢地倒人以上1000mL容 量瓶中，加水至刻度，摇匀后倒人试剂瓶，静止后用上清液， 4分析步骤 4.1取10mL比色管甲、乙两支，各加入0.1g试样，再各加1mL水，振摇半分钟（约100次），然后各 加入中性缓冲液1 mL。 4.2向上两管中的甲管（试样管）中加入尿素溶液1mL，再向乙管（空白对照管）中加入1mL水，将 甲、乙两管摇匀置于40℃水浴中保温20min 4.3从水浴中取出二管后，各加4mL水，摇匀再加10%钨酸钠溶液1mL，摇匀，再加5%硫酸1mL 摇匀过滤备用。 4.4取上述滤液2mL分别加人25mL具塞纳氏比色管（配套管）中，再按下述步骤操作。 4.4.1各加水15mL后再加入2%酒石酸钟钠1mL。 4.4.2各加人纳氏试剂2mL后再加水至25mL刻度 4.5摇匀后观察结果（见表1）。