ICS 67.200.20 B 33 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T30390—2013 油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定 高效液相色谱法 Determination of monosaccharide and disaccharide in oil seeds- High-performance liquid chromatography 2013-12-31发布 2014-06-22实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T30390—2013 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心 本标准主要起草人：李培武、胡小风、张文、丁小霞、周海燕 GB/T30390—2013 油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定。 本标准方法检出限：果糖、葡萄糖、蔗糖均为2mg/g。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB5491粮食、油料检验扦样、分样法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14489.1油料水分及挥发物含量测定 3原理 试样经沉淀蛋白质和萃取脂肪后过滤，滤液经氨基色谱柱分离，用高效液相色谱（带示差折光检测 器或蒸发光散射检测器）测定，外标法定量， 4试剂和材料 除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的二级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2石油醚：沸程30℃～60℃。 4.3乙酸锌溶液（1mol/L）：称取21.9g乙酸锌（C,H,O,Zn·2H,O），加3mL冰乙酸，加水溶解稀释 至100mL。 4.4亚铁氰化钾溶液（1mol/L)：称取10.6g亚铁氰化钾（K,[Fe(CN),J·3H,O)，加水溶解稀释至 100 mL. 4.5果糖、葡萄糖、蔗糖标准品纯度≥99%。 4.6糖系列标准储备液（20mg/g）：分别称取1g（精确至0.1mg）经过96℃土2℃干燥2h后的果 糖、葡萄糖、蔗糖标准品于50mL容量瓶中，加水溶解并定容。溶液放置于4℃下，可保存一个月。 4.7糖系列标准工作液：分别准确吸取糖系列标准储备液（4.6)0.00mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、 0.5mg/g、1.0mg/g、2.0mg/g、5.0mg/g、10.0mg/g浓度标准溶液。 5仪器设备 5.1高效液相色谱仪：带有示差折光检测器或者蒸发光散射检测器， 1 GB/T30390—2013 5.2 电子天平：感量0.1mg和1mg。 5.3 恒温烘箱。 5.4 磁力搅拌器。 5.5 粉碎机。 5.6 恒温水浴。 5.7 离心机：2000r/min。 6 样品制备 6.1 按GB/T5491取样品约200g，经粉碎机粉碎，过0.64mm孔径筛，置于密闭容器内。 6.2 花生样品应先切片，再经粉碎机粉碎。 7分析步骤 7.1提取 称取试样5g（精确至0.1mg），置于50mL具塞离心管中，加人25mL石油醚（4.2），旋涡振荡 1min，2000r/min离心5min，弃去上层石油醚。重复上述步骤2次。60℃水浴蒸发残留的石油醚， 用玻璃棒将样品转移至150mL恒重的锥形瓶中，用50mL水分两次冲洗离心管，洗液并入锥形瓶，缓 慢加人乙酸锌溶液（4.3）和亚铁氰化钾溶液（4.4）各5mL，再加水至溶液总质量约为100g（m2，精确至 1mg），室温搅拌30min后，用定性滤纸过滤，滤液再用0.45μm微孔滤膜过滤，待测。 7.2 2标准曲线绘制 吸取糖标准工作液（4.7）于进样瓶中，液相色谱仪（带示差折光检测器或蒸发光检测器）测定，以浓 度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线， 7.3样品中糖测定 吸取待测液于进样瓶中，液相色谱仪（带示差折光检测器或蒸发光检测器）测定，根据标准曲线计算 样液中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量，或者利用回归方程式计算样液中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量。色谱图 参见附录A。 7.4 色谱参考条件 7.4.1 色谱柱：氨基柱，4.6mm×250mm，5μm。 7.4.2柱温：40℃。 7.4.3流动相：乙（4.1）十水85十15（体积分数）。 7.4.4流速：1.0mL/min。 7.4.5进样体积：10μL。 7.4.6 色谱图：参见图A.1。 8 水分含量测定 按GB/T14489.1测定样品中水分含量。 2 GB/T30390—2013 结果计算 9 试样中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量以质量分数w计，数值用mg/g表示，按式（1)计算： cXmz 100% w= ..... (1) X 100%-w mj 式中： 样品中糖（果糖、葡萄糖、蔗糖）含量，单位为毫克每克（mg/g）； 根据标准曲线算出的样液中糖的含量，单位为毫克每克（mg/g）； 水溶液的总质量，单位为克（g）； m2 试样的质量，单位为克（g）； 水分及挥发物（质量分数），%。 02 测定结果取其两次测定的算术平均值，计算结果保留至小数点后一位 10 精密度 10.1重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于算术平均值的10%， 10.2 再现性 在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。